New England Biolabs, M0299S, Endonucleasa VIII

Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único sitio AP* en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 37 °C en tampón de reacción de endonucleasa VIII 1X que contiene 10 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcado con fluorescencia. * Un sitio AP se crea tratando 10 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único residuo de uracilo con 1 unidad de uracil-ADN glicosilasa (UDG) durante 2 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción Tampón de reacción de endonucleasa VIII 1X Incubar a 37 °C Tampón de reacción de endonucleasa VIII 1X Tris-HCl 10 mM NaCl 75 mM EDTA 1 mM (pH 8 a 25 °C) Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 250 mM EDTA 0,1 mM Glicerol al 50 % pH 8 a 25 °C Inactivación por calor 75 °C durante 10 minutos Condiciones del ensayo de la unidad Tampón de reacción de endonucleasa VIII 1X que contiene 10 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en un volumen de reacción total de 10 μl. Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de la endonucleasa VIII en los tampones NEBuffer? R: La endonucleasa VIII tiene una actividad del 75 % en los tampones NEBuffer 1 y 4, y del 50 % en el tampón NEBuffer 2. No se recomienda el uso del tampón NEBuffer 3. P: ¿La endonucleasa VIII escinde el ARN? R: La endonucleasa VIII no muestra actividad sobre el ARN. P: ¿El tratamiento del ADN con endonucleasa VIII deja un fosfato 5'? R: Sí. Tras la digestión con endonucleasa VIII, el ADN se puede ligar directamente sin necesidad de tratarlo con una quinasa. P: ¿Qué bases dañadas reconoce la endonucleasa VIII? R: Las bases dañadas que reconoce la endonucleasa VIII son: urea, 5,6-dihidroxitimina, timina glicol, 5-hidroxi-5-metilhidantoína, uracil glicol, 6-hidroxi-5,6-dihidrotimina y metiltartronilurea. P: ¿Funciona la endonucleasa VIII en el tampón rCutSmart? R: Sí, la endonucleasa VIII funciona en el tampón rCutSmart. Para ver su % de actividad funcional en rCutSmart y la de otras enzimas modificadoras de ADN en el flujo de trabajo de clonación, consulte la tabla Actividad de enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®.