Product Description
Categorías relacionadas Análisis de cromatina, Exonucleasas y endonucleasas no específicas, Síntesis de ARN Transcripción in vitro (IVT), Aplicaciones Clonación de ARN Especificación Materiales necesarios pero no suministrados Agua libre de nucleasas (NEB #B1500) Inhibidor de ARNasa, murino (NEB #M0314) EDTA Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima que degradará completamente 1 µg de ADN pBR322 en 10 minutos a 37 °C en tampón de reacción de ADNasa I. La degradación completa se define como la reducción de la mayoría de los fragmentos de ADN a tetranucleótidos o más pequeños. Condiciones de reacción Tampón de reacción 1X DNasa I Incubar a 37 °C Tampón de reacción 1X DNasa I Tris-HCl 10 mM MgCl2 2,5 mM CaCl2 0,5 mM (pH 7,6 a 25 °C) Concentración de uso 2000 unidades/ml Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM CaCl2 2 mM Glicerol al 50 % pH 7,6 a 25 °C Inactivación por calor 75 °C durante 10 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad específica de la DNasa I (libre de RNasa)? R: La actividad específica es de aproximadamente 20 000 unidades/mg. P: ¿Funcionará la DNasa I en los tampones NEB 1-4? R: Sí, pero no con la misma eficiencia. La DNasa I es una enzima dependiente del calcio, por lo que funciona mejor en su propio tampón que contiene cloruro de calcio. Se recomienda que incluso si está usando los tampones NEB 1-4, también agregue tampón de DNasa I o CaCl2 0,5 mM a la reacción. Además, a la DNasa I no le gusta la sal alta, como la contenida en el tampón NEB 3. Funciona menos eficientemente en el tampón 3, pero aún así dará una digestión del 50-75%. P: ¿Cuál es la mejor manera de eliminar la DNasa I de mi reacción? R: La mejor manera de eliminar la DNasa I de su reacción es realizar una extracción con fenol/cloroformo o usar una columna de centrifugación. Puede realizar el paso de inactivación por calor, pero es posible que eso no elimine por completo toda la DNasa I y podría interferir con sus aplicaciones posteriores. P: ¿Funcionará la DNasa I en el tampón rCutSmart? R: Sí, la DNasa I funcionará en rCutSmart, con la adición de calcio. Para ver su porcentaje de actividad funcional en rCutSmart y el de otras enzimas modificadoras de ADN en el flujo de trabajo de clonación, consulte la tabla de actividad de las enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®. P: ¿Puedo usar el kit de limpieza de ARN Monarch Spin para limpiar mi ARN tratado con DNasa I? R: Sí, los kits de limpieza de ARN Monarch Spin eliminarán la actividad residual de DNasa I (NEB n.° M0303) de las muestras de ARN. El tratamiento en columna con DNasa I a menudo puede resultar en actividad residual de DNasa I; por lo tanto, no recomendamos el tratamiento con DNasa I en columna con el kit de limpieza de ARN Monarch Spin, sino el tratamiento con DNasa I en solución antes de la limpieza del ARN.
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924