New England Biolabs, M0304L, Endonucleasa IV

Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único sitio AP* en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 37 °C. *Un sitio AP se crea tratando 10 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un único residuo de uracilo con 1 unidad de uracil-ADN glicosilasa (UDG) durante 2 minutos a 37 °C. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 3 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 3 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7,9 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 250 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml BSA 50 % Glicerol 0,15 % Triton® X-100 pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 85 °C durante 20 minutos Condiciones del ensayo unitario 1X NEBuffer 3 que contiene 10 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en un volumen de reacción total de 10 μl. Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de la endonucleasa IV en los NEBuffers? A: El tampón óptimo de Endo IV es 1X NEBuffer 3. No tiene actividad en NEBuffer 1, 100% en NEBuffer 2 y 25% en NEBuffer 4. P: ¿Cuál es el peso molecular de la Endonucleasa IV? R: El peso molecular de la Endonucleasa IV es de 31 kDa. P: ¿La Endonucleasa IV escinde el ssDNA? R: Sí, la Endonucleasa IV escinde sitios abásicos tanto en ssDNA como en dsDNA. P: ¿El extremo 5' que queda por una escisión de Endonucleasa IV será adecuado para la ligadura posterior por la ADN ligasa T4? R: El extremo 5' generado por la escisión de Endonucleasa IV no es adecuado para la ligadura. P: Además de los sitios AP, ¿la Endonucleasa IV tiene actividad de escisión en otros tipos de daño del ADN? R: La Endo IV también reconoce 5,6-dihidrotimina. Sin embargo, su actividad en este sustrato es menor que en los sitios AP. Para más información, consulte esta página en nuestro sitio web: (Enzimas Reparadoras de ADN). P: ¿Es posible crear un sitio abásico y luego escindirlo con la Endonucleasa IV en la misma reacción? ¿Cuál es la actividad de la uracil-ADN-glicosilasa (cat. n.° M0280S) en el tampón de Endonucleasa IV? R: El tampón de Endonucleasa IV es el tampón NE 3. La UDG es 100 % activa en el tampón NE 3 y, por lo tanto, es posible realizar ambas reacciones en dicho tampón.