New England Biolabs, M0308S, T4 PDG (T4 Endonucleasa V)

Categorías relacionadas: Enzimas reparadoras de ADN y endonucleasas estructurales específicas. Unidad de especificación: Definición. Una unidad se define como la cantidad de enzima que cataliza la conversión de 0,5 µg de ADN pUC19 superenrollado irradiado con UV en un plásmido con más del 95 % de melladuras en un volumen total de reacción de 20 μl en 30 minutos a 37 °C. La melladuras se evalúa mediante electroforesis en gel de agarosa. El plásmido irradiado contiene un promedio de 3 a 5 dímeros de pirimidina. Condiciones de reacción 1X T4 PDG Reacción Buffer Suplementado con 100 µg/ml Albúmina Recombinante, Grado de Biología Molecular Incubar a 37 °C 1X T4 PDG Reacción Buffer 100 mM NaCl 1 mM DTT 1 mM EDTA 25 mM Na2HPO4 (pH 7,2 a 25 °C) Almacenamiento Buffer 10 mM Tris-HCl 250 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50% Glicerol 0,15% Triton® X-100 pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor Sin unidad Condiciones de ensayo 1X T4 PDG Reacción Buffer que contiene 0,5 µg de ADN pUC19 superenrollado irradiado con UV, suplementado con 100 µg/ml Albúmina Recombinante en un 20 Reacción de μl. Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de T4 PDG en otros NEBuffers, incluido rCutSmart? R: T4 PDG es completamente activo en rCutSmart y NEBuffer 4 y 75% activo en NEBuffers 1-3. Todos los buffers que no tienen rAlbúmina como componente deberán ser suplementados con rAlbúmina. P: ¿Cuál es el peso molecular de T4 PDG? R: El peso molecular de T4 PDG es de 16 kDa. P: ¿Es T4 PDG una proteína marcada? R: No. T4 PDG no es una proteína marcada. P: ¿Puede usarse T4 PDG en el ensayo cometa? R: No hemos probado T4 PDG en el ensayo cometa. P: ¿T4 PDG elimina la base dañada? R: Sí. T4 PDG elimina la base dañada, a diferencia de la endonucleasa de daño UV, que solo mella el ADN. P: ¿Qué tipo de ADN dañado reconoce T4 PDG? A: T4 PDG reconoce dímeros de pirimidina cis-sin-ciclobutano causados ​​por la irradiación UV.