New England Biolabs, M0328S, ADN polimerasa Bst, longitud completa

Rendimiento óptimo en una variedad de aplicaciones Categorías relacionadas Amplificación isotérmica y aplicaciones de desplazamiento de hebras Amplificación isotérmica Especificación Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima que incorporará 10 nmol de dNTP en material insoluble en ácido en 30 minutos a 65 °C. Condiciones de reacción 1X ThermoPol® Reaction Buffer Incubar a 65 °C 1X ThermoPol® Reaction Buffer 20 mM Tris-HCl 10 mM (NH4)2SO4 10 mM KCl 2 mM MgSO4 0,1 % Triton® X-100 (pH 8,8 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 50 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % Glicerol 0,1 % Triton® X-100 pH 7,1 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 20 minutos Exonucleasa 5' - 3' Sí Exonucleasa 3' - 5' No Desplazamiento de cadena No Unidad Condiciones del ensayo 50 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (pH 8,8), 10 mM MgCl2, 30 nM M13mp18 SS DNA, 70 nM M13 sequencing primer (–47) 24-mer, 200 µM dATP, 200 µM dCTP, 200 µM dGTP, 100 µM dTTP incluyendo [3H]-dTTP y 100 µg/ml BSA. Preguntas frecuentes P: ¿Qué son las polimerasas Hot Start y WarmStart® y cuándo debería usarlas? R: Al configurar reacciones a temperatura ambiente fuera del hielo Cuando se observa una amplificación no específica ¿Qué significa Hot Start/Warm Start? Nuestras polimerasas Hot Start y WarmStart utilizan aptámeros que inhiben la actividad enzimática a temperatura ambiente, lo que desalienta la formación de productos no específicos. La presencia de estos aptámeros no altera la función enzimática central. La distinción entre Hot Start y WarmStart es que las enzimas Hot Start son termófilas mientras que las enzimas WarmStart® son mesófilas; El rango termodinámico de los aptámeros para las enzimas Hot Start y WarmStart es en gran medida similar. Los aptámeros son oligonucleótidos modificados que se unen a una molécula diana específica mediante interacciones no covalentes e incluyen modificaciones específicas de nucleobases que pueden mejorar los perfiles de inhibición o reducir los efectos secundarios no deseados. La ventaja de la inhibición basada en aptámeros sobre otras tecnologías Hot Start (como los anticuerpos) es que no requieren un paso de activación y se unen de forma reversible en función de la temperatura. NEB ofrece polimerasas con aptámeros para PCR de rutina, PCR de alta fidelidad, amplificación isotérmica y transcripción inversa. Estos aptámeros pueden dirigirse a diferentes funciones enzimáticas para diferentes polimerasas. Más información. ¿Por qué se llama "Hot Start"? Al igual que muchas ADN polimerasas de la Familia A sin corrección de errores, la Taq Polimerasa posee la capacidad de añadir bases al extremo del ssADN de forma independiente del molde, incluso a temperatura ambiente, y puede resultar en la adición de bases no específicas a los extremos de los cebadores de ADN en la reacción, lo que permite la hibridación fuera del objetivo y reduce la especificidad general de la reacción. Por el contrario, a temperaturas más altas, la unión no específica se reduce a medida que la hibridación se vuelve más estricta. Los primeros métodos para mitigar la actividad no deseada a baja temperatura se centraron en la exclusión de componentes clave de la reacción hasta que se aumentaba la temperatura de reacción, que luego se podían añadir a la mezcla, desencadenando la reacción en condiciones más restrictivas y de alta temperatura. Lea nuestro artículo destacado, "Uso de aptámeros para controlar las actividades enzimáticas Hot Start Taq y más allá", para ver datos que comparan la formación de productos para enzimas con y sin inhibición de la actividad basada en aptámeros.