Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, M0336S, hSMUG1

Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Definición de unidad de especificación Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para extraer 1 pmol de desoxiuracilo de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene un solo sitio dU en un volumen de reacción total de 10 μl en 1 hora a 37 °C. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 1 suplementado con 100 µg/ml de albúmina recombinante, grado de biología molecular Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 1 10 mM Bis-Tris-propano-HCl 10 mM MgCl2 1 mM DTT (pH 7 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 250 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml de albúmina recombinante 50 % de glicerol 0,15 % Triton® X-100 pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Peso molecular teórico: 29861 daltons Unidad Condiciones de ensayo 1X NEBuffer 1 suplementado con 100 µg/ml de albúmina recombinante que contiene 5 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en un volumen de reacción total de 10 μl. Después de la liberación de dU, el oligonucleótido se escinde tratando el sitio AP resultante con NaOH 100 mM durante 10 minutos a 80 °C. Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de hSMUG1 en los NEBuffers 1-4? R: hSMUG1 tiene actividad completa en NEBuffer 1, NEBuffer r1.1, NEBuffer 4 y rCutSmart. Tiene un 25% de actividad en NEBuffer 3. No se recomienda su uso en NEBuffer 2. P: ¿Cuál es el peso molecular de hSMUG1? R: El peso molecular de hSMUG1 es de 29,86 kDa. P: ¿Qué sustrato se utiliza para probar hSMUG1? R: Los sustratos utilizados para probar la actividad enzimática se enumeran bajo la definición de unidad para cada enzima. La hSMUG1 se analiza con un oligonucleótido de 34 meros que contiene un único sitio dU. P: ¿Es la hSMUG1 una proteína marcada? R: No. La hSMUG1 no es una proteína marcada.