New England Biolabs, M0357S, β-glucosiltransferasa del fago T4 (T4-BGT)

La β-glucosiltransferasa del fago T4 transfiere específicamente la fracción de glucosa de la uridina difosfoglucosa (UDP-Glc) a los residuos de 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) en el ADN bicatenario, produciendo beta-glucosil-5-hidroximetilcitosina (1,2). Categorías relacionadas: Detección y análisis de la hidroximetilación, Conversión enzimática para el análisis de la metilación del ADN, Especificación del análisis de la metilación del ADN. Definición de la unidad: Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para proteger 0,5 µg de ADN-T4gt contra la escisión por la endonucleasa de restricción MfeI. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 4 suplementado con 40 µM de uridina difosfato glucosa Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 4 50 mM de acetato de potasio 20 mM de tris-acetato 10 mM de acetato de magnesio 1 mM de DTT (pH 7,9 a 25 °C) Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento 20 mM de KPO4 200 mM de NaCl 0,25 mM de DTT 0,1 mM de EDTA 50 % de glicerol pH 7 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 10 minutos Peso molecular teórico: 40666 kDa Unidad Condiciones del ensayo 0,5 µg de T4gt-DNA, 1X NEBuffer 4 y 40 µM de UDP-glucosa en un tampón de 30 μl de reacción. Incubar durante 1 hora a 37 °C y luego 10 minutos a 65 °C. El grado de protección de T4-BGT se determina añadiendo 20 μl de tampón NE 4 1X y 10 unidades de MfeI. Tras 30 minutos de incubación a 37 °C, se realiza un análisis en geles de agarosa. Propiedades de la enzima: Actividad en tampones NE: Tampón NE 1 100 Tampón NE 2 50 Tampón NE 3 50 Tampón NE 4 100 % de supervivencia en una reacción: Se requiere un mínimo de 0,16 unidades durante 16 horas para proteger 0,5 µg de ADN-gt de T4 contra la escisión por MfeI. Preguntas frecuentes : ¿Funcionará la β-glucosiltransferasa del fago T4 (T4-BGT) en el tampón rCutSmart? R: La β-glucosiltransferasa del fago T4 (T4-BGT) funciona en el tampón rCutSmart. Para ver su porcentaje de actividad funcional en rCutSmart y el de otras enzimas modificadoras de ADN en el proceso de clonación, consulte la tabla de actividad de las enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®.