Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, M0526S, Sce PUS1

Este es un Categorías relacionadas Análisis del epitranscriptoma,, Modificación del ARN Especificación Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r1.1 Incubar a 30 °C 1X NEBuffer™ r1.1 10 mM Bis-Tris-Propano-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7 a 25 °C) Inactivación por calor 55 °C Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es el efecto de la concentración de Mg2+ en la actividad de Sce PUS1? R: Para ciertas plantillas de ARN, encontramos que la ausencia de Mg2+ en el tampón de reacción puede tener un efecto estimulador en la actividad de Sce PUS1, mientras que puede tener un efecto inhibidor en otras. En otras plantillas de ARN, puede requerirse Mg2+ para una actividad eficiente de Sce PUS1. P: ¿Cómo se puede mejorar la actividad de Sce PUS1 cuando se utilizan bajas concentraciones de ARN? R: La adición de un 10 % de PEG 300 puede mejorar la actividad de Sce PUS1, especialmente cuando se utilizan bajas concentraciones de ARN. P: ¿Qué efecto tiene el MnCl₂ en la actividad de Sce PUS1? R: El MnCl₂ en concentraciones > 1 mM tiene un efecto inhibidor en Sce PUS1. P: ¿Cuál es el efecto de la concentración de NaCl en la actividad de Sce PUS1? R: Sce PUS1 es sensible al NaCl; concentraciones > 50 mM inhibirán la actividad de Sce PUS1. P: ¿Puede Sce PUS1 modificar más de 1 µg de ARN en una reacción? R: Dependiendo del sustrato, puede ser necesario Sce PUS1 adicional para convertir > 1 µg de ARN. Sin embargo, recomendamos configurar múltiples reacciones que contengan < 1 µg para garantizar una mayor eficiencia. P: ¿Puedo aumentar o reducir el volumen de reacción de Sce PUS1? R: Observamos una disminución en la actividad de Sce PUS1 en volúmenes de reacción menores o mayores de 100 µl. Por lo tanto, recomendamos un volumen de reacción mínimo de 100 µl y utilizar múltiples reacciones de 100 µl si se necesita aumentar la escala para sustrato adicional. P: ¿Puedo acortar o extender el tiempo de incubación de Sce PUS1 con ARN diana? R: Observamos que la mayoría de las uridinas diana de Sce PUS1 se convierten en pseudouridinas después de 2 horas de incubación. Sin embargo, los sitios diana preferidos pueden convertirse después de tiempos de incubación más cortos. Dependiendo del sustrato, una incubación de más de 2 horas puede aumentar aún más la tasa de conversión de uridina a pseudouridina. P: ¿Pueden darme más información sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NE? A: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.