New England Biolabs, M0543L, NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix

Categorías relacionadas, Mezclas maestras, Secuenciación de próxima generación, Aplicaciones de preparación de bibliotecas, Polimerasas para preparación de bibliotecas NGS, PCR de inicio en caliente, PCR rápida, Especificación , Inactivación por calor, No, Preguntas frecuentes. P: ¿Qué novedades hay sobre la mezcla maestra para PCR NEBNext® Q5 Hot Start HiFi? R: La mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi se ha optimizado para aumentar el rendimiento de la PCR durante la amplificación por PCR de bibliotecas NGS. Su naturaleza de inicio en caliente basada en aptámeros la hace ideal para la automatización y es compatible con muchas perlas magnéticas carboxiladas, tosiladas y de estreptavidina que se utilizan a menudo en los flujos de trabajo NGS. P: ¿Qué tipos de perlas se pueden utilizar con la mezcla maestra para PCR NEBNext® Q5 Hot Start HiFi? R: La mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi se puede utilizar en flujos de trabajo que utilizan microesferas magnéticas carboxiladas, como Agencourt® AMPure® XP (Beckman Coulter, Inc.), Sera-Mag™ SpeedBeads™ (GE Healthcare Life Sciences) y Mag-Bind® RXNPure (Omega Bio-tek, Inc.), junto con microesferas de estreptavidina carboxilada, como Dynabeads® MyOne™ Streptavidin C1 y Dynabeads® M-270 Streptavidin (Life Technologies). También se puede utilizar con microesferas de estreptavidina tosilada, como Dynabeads® MyOne™ Streptavidin T1 y Dynabeads® Streptavidin M-280 (Life Technologies). Dado que los fabricantes de microesferas varían y las concentraciones de las microesferas no siempre se divulgan, recomendamos minimizar la cantidad de microesferas presentes en la PCR siempre que sea posible. P: ¿Es la mezcla maestra NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix igual que la mezcla maestra Q5® Hot Start High-Fidelity 2X (M0494)? R: No. Aunque ambas mezclas maestras contienen ADN polimerasa Q5 Hot Start High-Fidelity, su composición es diferente. La mezcla maestra NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix se ha optimizado específicamente para una amplificación robusta de bibliotecas NGS, mientras que la mezcla maestra Q5 Hot Start High-Fidelity 2X se ha optimizado para la amplificación de diversas plantillas, incluyendo amplicones más largos. P: ¿Es la mezcla maestra NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix igual que la mezcla maestra NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)? R: No. Aunque ambas mezclas maestras contienen ADN polimerasa Q5 High-Fidelity, su composición es diferente. La mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi se ha optimizado específicamente para una amplificación aún más robusta de bibliotecas NGS en presencia o ausencia de microesferas magnéticas. Su capacidad de arranque en caliente la hace ideal para flujos de trabajo que implican automatización. P: ¿Es la mezcla maestra para PCR NEBNext® Q5 Hot Start HiFi lo mismo que la mezcla maestra para PCR NEBNext® High-Fidelity 2X (M0541) o la mezcla maestra para PCR Q5 Hot Start High-Fidelity 2X (M0494)? R: No. Aunque las tres mezclas maestras contienen ADN polimerasa Q5 High-Fidelity, solo la mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi se ha optimizado para una amplificación especialmente robusta y de bajo sesgo. Su capacidad de arranque en caliente y su capacidad para amplificar en presencia de microesferas magnéticas le otorgan ventajas sobre su predecesora, la mezcla maestra para PCR NEBNext High-Fidelity 2X, en aplicaciones NGS. La mezcla maestra para PCR Q5 Hot Start High-Fidelity 2X también contiene el aptámero de inicio en caliente para una configuración cómoda a temperatura ambiente, pero se ha optimizado para la amplificación de diversas plantillas, incluyendo amplicones más largos. P: ¿Debo modificar las condiciones de ciclado para la amplificación de mi biblioteca NGS que he usado previamente con la mezcla maestra para PCR Phusion High-Fidelity? R: Sí. Las condiciones de ciclado para la mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi difieren de las recomendadas para la mezcla maestra para PCR Phusion High-Fidelity. La mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi se ha optimizado para una amplificación robusta y de bajo sesgo de bibliotecas NGS. Recomendamos usar una temperatura de extensión de 65 °C para esta aplicación. Consulte las instrucciones incluidas en los manuales del kit NEBNext para obtener más detalles. P: ¿Cuántos ciclos de PCR debo realizar con la mezcla maestra para PCR NEBNext® Q5 Hot Start HiFi? R: Depende de la cantidad de entrada. Para su uso con los kits NEBNext, consulte las instrucciones incluidas en los manuales del producto. P: ¿Los productos de ADN producidos por NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix tienen extremos romos o una sola base saliente 3'? R: Al igual que todos los productos Q5, NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix produce extremos romos. P: ¿Qué hago si observo precipitado en NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix? R: Al descongelar NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix, se puede formar un precipitado. Para garantizar un rendimiento óptimo, deje que la mezcla maestra alcance la temperatura ambiente. Una vez descongelada, mezcle suavemente invirtiendo el tubo varias veces. P: ¿Cuáles son las ventajas de usar NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix? R: NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix ofrece una combinación única de ultraalta fidelidad y una amplificación robusta de bibliotecas NGS, independientemente del contenido de GC. Ofrece rendimientos de PCR incluso mayores que su predecesor, NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix. Además, gracias a su capacidad de arranque en caliente, la mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi es ideal para flujos de trabajo que requieren automatización. Es compatible con diversas microesferas carboxiladas, tosiladas y de estreptavidina que pueden transferirse o incluirse en el paso de PCR de los protocolos de construcción de bibliotecas. P: ¿La mezcla maestra para PCR NEBNext® Q5 Hot Start HiFi incorpora dUTP? R: No. La mezcla maestra para PCR NEBNext Q5 Hot Start HiFi no incorpora dUTP y no es compatible con ADN tratado con bisulfito. Para protocolos que emplean ADN tratado con bisulfito, se puede utilizar la ADN polimerasa EpiMark™ Hot Start.