New England Biolabs, M0607S, Pirofosfatasa NudC

Esta es una Enzima para la Innovación (EFI). EFI es un proyecto iniciado por NEB para proporcionar enzimas únicas a la comunidad científica con la esperanza de facilitar el descubrimiento de aplicaciones nuevas e innovadoras. Estas enzimas poseen propiedades interesantes y especificidades únicas. Categorías relacionadas: Modificación de ARN: Unidad de especificación: Definición: 1 µM de NudC hidroliza 200 µM o más de NAD+ en NMN+ y AMP en tampón NE 3.1 1X y DTT 5 mM a 37 °C durante 30 min. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Suplemento con 5 mM de DTT Incubar a 37 °C NEBuffer™ r3.1 100 mM de NaCl 50 mM de Tris-HCl 10 mM de MgCl2 100 µg/ml de albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 300 mM de NaCl 10 mM de Tris-HCl 1 mM de DTT 0,1 mM de EDTA 50 % de glicerol pH 7,9 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 10 minutos Preguntas frecuentes P: ¿NudC (NEB n.º M0607) destapa otras estructuras de tapa? R: El NEB ha descubierto que NudC descapsula el ARN modelo que contiene un ARNm con un grupo App- 5′ (adenilado) y una adenosina como nucleótido iniciador, con una eficiencia diferente a la del ARN con NAD+. Se ha descrito que NudC hidroliza dinucleótidos como ADP-ribosa, ADP-glucosa y cofactores metabólicos que contienen una fracción de ADP, como FAD (1), coenzima A y acetilcoenzima A (resultados no publicados). Por lo tanto, NudC puede potencialmente descapsular el ARN que porta una gran cantidad de nucleótidos iniciadores canónicos y no canónicos, no limitados a NAD+/NADH. 1. Frick DN y Bessman MJ (1995) J. Biol. Chem. 270, 1529-1534. P: ¿Descapsula NudC el ARN canónico con G-cap? R: El NEB ha descubierto que NudC descapsula eficazmente el ARN con capuchón G y adenosina como nucleótido iniciador, mientras que el ARN con capuchón G y guanosina lo hace con mucha menor frecuencia. P: ¿Es posible usar NudC para generar ARN monofosfato 5' ligable únicamente a partir de nucleótidos iniciadores no canónicos? R: Para aplicaciones donde se deben distinguir las estructuras de capuchón no canónicas del ARN con capuchón G en un flujo de trabajo basado en la ligadura 5', se puede pretratar la muestra de ARN con yDcpS (NEB n.° M0463), seguido de un CIP rápido (NEB n.° M0525) y una etapa de purificación de ARN para convertir el ARN con capuchón G y el ARN fosforilado 5' existente en ARN 5'hidroxilado, que no está disponible para la ligadura. P: ¿La actividad de descapsulación de NudC se ve afectada por la estructura del ARN? R: Sí. Se ha informado que la tasa de descapsulado de NudC es más lenta en el ARN que contiene una estructura secundaria 5' (1). Si se espera que el ARN contenga una estructura secundaria sustancial, se puede aumentar la concentración de enzima y/o aumentar el tiempo de incubación para lograr un mayor nivel de descapsulado. 1. Höfer K. et al. (2016) Nat Chem Biol.12, 730-734. P: ¿Qué son las enzimas para la innovación? R: Enzimas para la innovación (EFI) es un proyecto iniciado por NEB para proporcionar enzimas únicas a la comunidad científica con la esperanza de permitir el descubrimiento de aplicaciones nuevas e innovadoras. Estas enzimas tienen propiedades interesantes y especificidades únicas que no están disponibles comercialmente en ningún otro lugar con la calidad que se esperaría de NEB. Los graduados de Enzimas para la innovación son enzimas que han pasado de tener aplicaciones desconocidas o exploratorias a convertirse en la piedra angular de una aplicación definida. Si tiene una idea para una "Enzima para la Innovación" con una aplicación sugerida que pueda ser útil, envíenos un correo electrónico a EnzymesForInnovation@neb.com. Para más información, vea el video. P: ¿Puede contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.