New England Biolabs, M0659S, 5-hidroximetiluridina ADN quinasa

Categorías relacionadas Aplicaciones de las quinasas Modificación de extremos de ADN, Fosforilación (quinasa) Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para proteger 1 µg de ADN genómico del bacteriófago SP8 de Bacillus subtilis en 30 minutos a 37 °C en un volumen de reacción total de 20 μl contra la escisión posterior por la endonucleasa de restricción NcoI-HF. Condiciones de reacción Tampón de reacción de la ligasa del ADN T4 1X Incubar a 37 °C Tampón de reacción de la ligasa del ADN T4 1X Tris-HCl 50 mM MgCl2 10 mM ATP 1 mM DTT 10 mM (pH 7,5 a 25 °C) Tampón de almacenamiento NaCl 300 mM Tris-HCl 10 mM EDTA 0,1 mM DTT 1 mM Glicerol al 50 % pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 10 minutos Condiciones del ensayo de la unidad Tampón de reacción de la ligasa del ADN T4 1X, 1 µg de ADN genómico del bacteriófago SP8 de Bacillus subtilis en un volumen de reacción total de 20 μl. La mezcla de reacción se incuba durante 30 minutos a 37 °C y luego se incuba a 80 °C durante 10 minutos. La confirmación de la fosforilación se determina mediante la protección de la escisión posterior por la endonucleasa de restricción NcoI-HF. La mezcla de reacción se trata con 2 μl de tampón rCutSmart 10X y 20 unidades de endonucleasa de restricción NcoI-HF. La incubación a 37 °C durante 30 minutos es seguida por el análisis en un gel de agarosa. Preguntas frecuentes : P: ¿En qué sustratos de ADN se ha probado la 5-hidroximetiluridina ADN quinasa (5-HMUDK)? R: La 5-HMUDK se ha probado utilizando ADN genómico del bacteriófago SP8 de Bacillus subtilus. Al igual que los bacteriófagos SPO1 y øe, el ADN genómico de SP8 contiene 5-hidroximetildesoxiuracilo (5-hmdU), que reemplaza completamente a la timidina. Estos tres fagos que contienen 5-hmdU están disponibles en la ATCC. P: ¿Cuál es la actividad de la 5-hidroximetiluridina ADN quinasa (5-HMUDK) a otras temperaturas, tampones, etc.? R: La 5-HMUDK muestra una actividad similar a 30 °C y 37 °C tanto en el tampón de reacción de la ADN ligasa T4 (suministrado) como en el tampón rCutSmart® (cuando se complementa con 1 mM de ATP). P: ¿Puedo comprar grandes cantidades de una enzima existente para la innovación? R: Sí, si necesita grandes cantidades de una enzima para la innovación, póngase en contacto con NEB en EnzymesForInnovation@neb.com. Tenga en cuenta que la disponibilidad puede ser limitada y, por lo tanto, se requieren plazos de entrega más largos para pedidos grandes. También podrían ser necesarias pruebas de control de calidad adicionales para satisfacer su aplicación y necesidades específicas. P: ¿Qué son las enzimas para la innovación? R: Enzymes for Innovation (EFI) es un proyecto iniciado por NEB para proporcionar enzimas únicas a la comunidad científica con la esperanza de facilitar el descubrimiento de aplicaciones nuevas e innovadoras. Estas enzimas poseen propiedades interesantes y especificidades únicas que no están disponibles comercialmente en otros lugares con la calidad que se espera de NEB. Los graduados de Enzimas para la Innovación son enzimas que han pasado de tener aplicaciones desconocidas o exploratorias a convertirse en la piedra angular de una aplicación definida. Si tiene una idea para una "Enzima para la Innovación" con una aplicación sugerida que pueda ser útil, envíenos un correo electrónico a EnzymesForInnovation@neb.com. Para más información, vea el video.