New England Biolabs, M0663S, exonucleasa T5

Este producto reemplaza la exonucleasa T5 (NEB n.° M0363). Categorías relacionadas: Exonucleasas y endonucleasas no específicas. Aplicaciones. Especificación del conjunto Gibson. Definición de unidad: 1 unidad de exonucleasa T5 se define como la cantidad de enzima necesaria para provocar un cambio de 0,00032 A260 nm/min a 37 °C en el tampón rCutSmart. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ 4 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ 4 50 mM de acetato de potasio 20 mM de Tris-acetato 10 mM de acetato de magnesio 1 mM de DTT (pH 7,9 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 50 mM de Tris-HCl 100 mM de NaCl 1 mM de DTT 0,1 mM de EDTA 50 % de glicerol 0,1 % de Triton® X-100 pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor Sin unidad Condiciones del ensayo 1X CutSmart Buffer; 40 µg/ml de ADN de esperma de salmón Preguntas frecuentes P: ¿En qué se diferencia la exonucleasa T5 de la exonucleasa Lambda (NEB n.º M0262)? R: A diferencia de la exonucleasa Lambda, la exonucleasa T5 puede degradar el dsADN circular mellado. La exonucleasa T5 también actúa sobre el ADNmc, mientras que la exonucleasa Lambda no. P: ¿La exonucleasa T5 escinde el ADNdc superenrollado? R: No. Las exonucleasas de ADNdc generalmente no escinden el ADN superenrollado o circular cerrado. Las exonucleasas necesitan un extremo o una muesca para iniciar su actividad. P: ¿En qué se diferencia la exonucleasa T5 de la exonucleasa III (NEB# M0206)? R: La exonucleasa III actúa en la dirección 3' a 5', al contrario de la exonucleasa T5, que actúa en la dirección 5' a 3'. P: ¿Cuál es la actividad de la exonucleasa T5 en los NEBuffers? R: NEBuffer 1: menos del 20% NEBuffer 2: 75% NEBuffer 3: 50% NEBuffer 4: 100% P: ¿Se puede inactivar la exonucleasa T5 por calor? R: No. P: ¿Se puede despuntar el ADN con la exonucleasa T5? R: No. Utilice la ADN polimerasa I, fragmento grande (Klenow) (NEB# M0210) para rellenar los salientes de 5' (también llamados extremos cóncavos de 3') y reducir los salientes de 3', o utilice la nucleasa de frijol mungo (NEB# M0250) para reducir los salientes de 3' o 5'. Nota: Los salientes de 3' no se pueden rellenar. P: ¿Funcionará la exonucleasa T5 en el tampón rCutSmart? R: Sí, la exonucleasa T5 funcionará en el tampón rCutSmart. Para ver su porcentaje de actividad funcional en rCutSmart y el de otras enzimas modificadoras de ADN en el proceso de clonación, consulte la tabla de actividad de las enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®. P: ¿Cuál es la diferencia entre la exonucleasa T5 (NEB n.° M0363) y la exonucleasa T5 (NEB n.° M0663)? R: La exonucleasa T5 (NEB n.° M0663) es una versión con etiqueta His de la exonucleasa T5 descontinuada (NEB n.° M0363). La definición de la unidad se ha modificado para que coincida con la versión del producto con grado GMP*. El rendimiento del producto, la concentración de proteínas y las condiciones de reacción se mantienen sin cambios. * "Grado GMP" y "grado GMP" son términos de marca que NEB utiliza para describir los productos fabricados o terminados en sus instalaciones en Rowley. Estas instalaciones se diseñaron para fabricar productos bajo una infraestructura y controles de proceso más rigurosos para cumplir con las especificaciones de producto y los requisitos del cliente más exigentes. Los productos fabricados en nuestras instalaciones en Rowley cumplen con las normas de sistemas de gestión de calidad ISO 9001 e ISO 13485. Sin embargo, en este momento, NEB no fabrica ni vende productos conocidos como Ingredientes Farmacéuticos Activos (API), ni tampoco fabrica sus productos de conformidad con todas las regulaciones actuales de Buenas Prácticas de Manufactura.