New England Biolabs, M5505S, enzima USER®

La enzima USER ha sido reformulada con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10233215. Categorías relacionadas Enzimas de reparación de ADN y endonucleasas específicas de la estructura Aplicaciones Aplicaciones de las enzimas USER® y termolábiles USER II,, USER, ®, Clonación,, Ensamblaje y clonación de ADN, Especificación Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para cortar 10 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 meros que contiene una sola base de uracilo, en 15 minutos a 37 °C en un volumen de reacción total de 10 μl. Condiciones de reacción 1X tampón rCutSmart™ Incubar a 37 °C 1X tampón rCutSmart™ Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 5 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 175 µg/ml Albúmina recombinante Glicerol al 50 % KCl 50 mM pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor No Preguntas frecuentes P: ¿Funcionará la enzima USER en el tampón rCutSmart? R: La enzima USER funcionará en el tampón rCutSmart. Para ver su % de actividad funcional en rCutsmart, y la de otras enzimas modificadoras de ADN en el flujo de trabajo de clonación, consulte la tabla de Actividad de las enzimas modificadoras de ADN en el tampón rCutSmart®. P: ¿Dónde puedo encontrar información o un protocolo para clonar con la enzima USER®? R: https://www.neb.com/applications/cloning-and-synthetic-biology/user-cloning P: Durante la preparación de una biblioteca de ADN NEBNext, ¿qué enzima escinde los adaptadores de bucle de ADN NEBNext y los bucles monocatenarios que contienen uracilo? R: La enzima USER está hecha de UDG y endonucleasa VIII. El UDG ayuda a crear un espacio en el sitio del uracilo y la endonucleasa VIII va a ese sitio y escinde la cadena principal de fosfodiéster en los lados 3' y 5' liberando desoxirribosa libre de bases. P: ¿Podrían contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar la transición de los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: ¿Cuál es la diferencia entre el conjunto de enzimas USER® (#M5505, #M5508, #M5509) y la endonucleasa termoestable Q (#M0701)? A: Los productos USER (enzima USER (#M5505), enzima termolábil USER II (#M5508) y enzima termoestable USER III (#M5509) son una mezcla de dos enzimas: UDG y una endonucleasa. Por el contrario, la endonucleasa termoestable Q (#M0701) es una sola enzima. Aunque las enzimas USER y la endonucleasa termoestable Q reconocen y escinden en el desoxiuracilo en los sustratos de ADN, los productos resultantes son diferentes. Los productos finales de las enzimas USER son huecos de un nucleótido con extremos funcionales variables según el tipo de USER implementado; se elimina el desoxiuracilo. Los productos de la endonucleasa termoestable Q son mellas con un 3'-OH y un 5'-fosfato; el desoxiuracilo todavía está presente en el segmento 3' del ADN. P: ¿Alguna de las enzimas USER deja extremos ligables al escindir en un ¿Uracilo? R: No, ni la enzima USER (NEB #M5505), ni la enzima termolábil USER II (NEB #M5508) ni la enzima termoestable USER III (NEB #M5509) dejan extremos ligables al escindir un uracilo. Sin embargo, la endonucleasa termoestable Q (NEB #M0701) corta el extremo 5' del uracilo (dejando la nucleobase intacta), pero deja extremos ligables 3' OH y 5' P tras la escisión. P: ¿A qué distancia de los extremos del ADN puede escindir la enzima USER (NEB #M5505)? R: La enzima USER® escinde un desoxiuracilo a tan solo 3 pares de bases del extremo 5' del ADN bicatenario o al menos 9 nucleótidos del extremo 5' del ADN monocatenario. La enzima USER escinde un desoxiuracilo a 6 Pares de bases o nucleótidos del extremo 3' del ADN, ya sea bicatenario o monocatenario. Para más información, consulte "Escisión del desoxiuracilo cerca de los extremos del ADN bicatenario y el ADN monocatenario".