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BRAND / VENDOR: New England Biolabs

New England Biolabs, M7636S, ADN girasa (E. coli)

CATALOG NUMBER: M7636S
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Product Description
Categorías relacionadas Otros,, Enzimas modificadoras de ADN y tecnologías de clonación Especificación Materiales necesarios pero no suministrados Agua libre de nucleasas (NEB #B1500) Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para convertir 0,5 µg de plásmido pUC19 relajado a la forma superenrollada en tampón de reacción de girasa 1X incubado durante 15 minutos a 37 °C en un volumen de reacción total de 30 μl. Condiciones de reacción Tampón de reacción de girasa 1X Incubar a 37 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Preguntas frecuentes P: ¿Puede la ADN girasa (E. coli) (NEB #M7636) crear superenrollamientos en ADN circular cerrado y abierto? R: La ADN girasa (E. coli) puede superenrollar ADN circular cerrado, pero no ADN circular abierto. P: ¿Puede la ADN girasa (E. coli) (NEB n.° M7636) actuar sobre el ADN lineal? R: No. La ADN girasa (E. coli) actúa específicamente sobre el ADN circular cerrado y no introduce superenrollamientos en el ADN lineal. P: ¿Es la ADN girasa (E. coli) (NEB n.° M7636) compatible con los procesos de transformación o transfección? R: Sí. El ADN superenrollado generado por la girasa es adecuado para la transformación y puede mejorar la eficiencia de la transfección en algunos sistemas. P: ¿Existen contaminantes que inhiban la actividad de la ADN girasa (E. coli) (NEB n.° M7636)? R: Sí. Evite el EDTA, el SDS, el fenol u otros contaminantes en las preparaciones de ADN, ya que pueden inhibir la función enzimática. P: ¿Cómo se debe procesar el ADN tratado con ADN girasa (E. coli) (NEB n.° M7636) en un gel? R: Para comprobar el resultado de una reacción de topoisomerasa o girasa, esta debe analizarse en un gel con un tampón de gel que no contenga EtBr. El gel puede teñirse posteriormente con EtBr. P: ¿El número de enlace (ΔLk) o la densidad superhelicoidal (σ) resultantes de la reacción de la ADN girasa (E. coli) (NEB #M7636) son fijos o aleatorios? R: El número de enlace resultante no es ni aleatorio ni fijo. Existe una distribución de moléculas con diferentes números de giros, basada en un número medio. Este valor puede variar en función de factores como el pH, la temperatura, la fuerza iónica, la secuencia, la longitud, la formación cruciforme, etc. P: ¿La ADN girasa (E. coli) (NEB #M7636) añadirá superenrollamientos negativos adicionales al ADN que ya está parcialmente superenrollado? R: La ADN girasa (E. coli) puede añadir superenrollamientos negativos a un ADN circular, incluso si ya está parcialmente superenrollado, hasta que no se puedan introducir más superenrollamientos. P: ¿Funciona la ADN girasa de E. coli con otros NEBuffers? R: La ADN girasa de E. coli no funciona bien con otros NEBuffers. No muestra actividad en el tampón de reacción de la ADN ligasa T4. Cuando los NEBuffers se suplementan con una concentración final de ATP de 1,75 mM, la actividad observada es: NEBuffer™ r1.1: 0 % NEBuffer™ r2.1: 0 % NEBuffer™ r3.1: 0 % rCutSmart™ Buffer: 12,5 %

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