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BRAND / VENDOR: New England Biolabs

New England Biolabs, N0364S, escalera de ARN monocatenario de bajo rango

CATALOG NUMBER: N0364S
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Product Description
Categorías relacionadas Marcadores y escaleras de ARN,, Marcadores y escaleras de ARN Especificación Tampón de almacenamiento Citrato de sodio 20 mM EDTA 1 mM pH 6 a 25 °C Preguntas frecuentes P: ¿Qué tipos de geles se recomiendan para las escaleras de ssRNA y dsRNA? (N0363, N0362, N0364) R: En general, cuando se trabaja con moléculas de ARN monocatenario, se debe utilizar un gel desnaturalizante, un tampón/colorante de carga de muestra desnaturalizante que contenga formamida o urea y SYBR Gold para la tinción. El tinte SYBR Gold se une preferentemente a moléculas monocatenarias y, por lo tanto, proporciona una buena visualización de las bandas después de la electroforesis en gel. En algunos casos, cuando las moléculas de ssRNA son de gran tamaño, como la escalera de ssRNA (N0362S), se puede utilizar un gel nativo y teñir el gel con bromuro de etidio. Pero tenga en cuenta que las muestras de ssRNA siempre deben prepararse utilizando un tampón/colorante de carga de muestra desnaturalizante que contenga formamida o urea. Cuando se trabaja con moléculas de ARN bicatenario, solo se necesita usar un gel nativo, un tampón/colorante de carga de muestra no desnaturalizante y teñir el gel con bromuro de etidio, SYBR Green o SYBR Safe. P: ¿Qué tipos de gel y colorantes de tinción puedo usar para la escalera de ssRNA de bajo rango de NEB (N0364S)? R: La escalera de ssRNA de bajo rango preparada (N0364S) se puede procesar en un gel nativo de agarosa-TBE al 2,0% o en un gel desnaturalizante de TBE-urea al 6% (Life Technologies). El gel se puede teñir con SYBR Gold o bromuro de etidio. P: ¿Por qué las bandas de la escalera de ssRNA de bajo rango en mi gel de agarosa-TBE al 2% no se resuelven bien? R: Asegúrese de desnaturalizar correctamente la escalera. Después de añadir 2 µL de escalera de ARN monocatenario de bajo rango a 38 µL de colorante de carga de ARN, incube esta mezcla a 90 ˚C durante 3-5 minutos o a 70 ˚C durante 10 minutos y enfríela en hielo durante 2 minutos antes de cargarla. P: ¿Por qué tengo bandas adicionales de la escalera de ARN monocatenario de bajo rango en mi gel desnaturalizante de TBE-urea al 6%? R: La presencia de bandas adicionales en un gel desnaturalizante indica que la escalera no se desnaturalizó correctamente o que se sobrecargó. P: ¿Funcionará la escalera de ARN monocatenario de bajo rango en geles de TBE-urea al 10% y al 15%? R: Sí. Al utilizar geles desnaturalizantes con alto porcentaje de poliacrilamida para procesar la escalera de ARN monocatenario de bajo rango, se debe usar una cantidad menor de escalera que la recomendada en el protocolo para procesar una TBE-urea al 6%. Por ejemplo, solo se necesitan de 0,03 µL a 0,06 µL de escalera por carril en un gel Novex de TBE-urea al 10 % (10 pocillos) o ≤0,03 µL de escalera por carril en un gel Novex de TBE-urea al 15 % (12 pocillos). P: ¿Cuál es la concentración de ARN en la escalera de ARN monocatenario (NEB n.° N0362) y en la escalera de ARN monocatenario de bajo rango (NEB n.° N0364)? R: Dado que las escaleras de ARN están diseñadas como estándares de tamaño y no para cuantificación, no publicamos la concentración de estos productos. El criterio de autorización para las escaleras es la inspección visual del patrón electroforético. Aunque nos esforzamos al máximo por mantener la consistencia del perfil de escalera y la intensidad de las bandas, la concentración de ARN puede variar entre lotes. Por ello, no recomendamos estos productos para fines de cuantificación.

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Tony Tang

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