New England Biolabs, N2102S, marcador de microARN

Categorías relacionadas Marcadores y escaleras de ARN, Preguntas frecuentes sobre marcadores y escaleras de ARN P: ¿Puedo usar el marcador de microARN en un gel no desnaturalizante? R: No se recomienda usar este producto en geles no desnaturalizantes. El marcador de microARN está diseñado para medir el tamaño de pequeñas moléculas de ARNmc en un gel desnaturalizante. Se suministra en un tampón desnaturalizante para ese propósito. P: ¿Debo desnaturalizar el marcador de microARN antes de cargarlo en mi gel? R: Sí. El marcador de microARN se suministra en un tampón de carga desnaturalizante. Se puede calentar a 95 °C durante 5 minutos y luego enfriar en hielo antes de cargarlo. P: ¿Cuál es la diferencia entre el marcador de ARNi y el marcador de microARN (descontinuado)? R: El marcador de ARNi (descontinuado) consiste en tres dúplex de ARN sintéticos no fosforilados. Este marcador se usa para medir el tamaño de pequeñas moléculas de ARNdc como el ARNi. El marcador de ARNip no debe desnaturalizarse antes de la electroforesis en un gel nativo. El marcador de microARN (NEB n.° N2102S) está compuesto por tres moléculas sintéticas de ARN monocatenario no fosforiladas, suministradas con un tampón desnaturalizante. Este marcador se utiliza para medir el tamaño de ARN monocatenarios pequeños, como las moléculas de microARN. El marcador de microARN se utiliza en geles desnaturalizantes y se tiñe con SYBR® Gold (Invitrogen) para su visualización. Este marcador también puede detectarse mediante hibridación con la sonda biotinilada proporcionada. Además, esta sonda biotinilada puede marcarse con γ32P-ATP utilizando la polinucleótido quinasa T4 (NEB n.° M0201S), ya que la sonda tiene un extremo 5' libre. P: ¿Puedo usar EtBr para teñir el marcador de microARN después de la electroforesis en gel? R: No. No recomendamos usar bromuro de etidio (EtBr) para teñir el marcador de microARN, ya que el EtBr no quela bien las moléculas de ARN monocatenario. En general, para tener una buena visualización de las moléculas de ARN monocatenario después de la electroforesis en gel, el gel debe teñirse con SYBR Gold (disponible en Life Technologies). Además, el paso de tinción debe ser breve, es decir, de 1 a 2 minutos, de lo contrario, las pequeñas moléculas de ARN monocatenario del marcador de microARN se difundirán fuera del gel. P: ¿Debo cargar más marcador de microARN para obtener una mejor visibilidad de las bandas después de teñir el gel con EtBr? R: No. Cargar más de la cantidad recomendada no mejora la visibilidad de las bandas cuando el gel se tiñe con EtBr. Para visualizar las bandas del marcador de microARN, el gel debe teñirse con SYBR Gold (disponible en Life Technologies).