New England Biolabs, N3011S, ADN Lambda

Categorías relacionadas Plásmidos y sustratos de ADN Especificación Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 1 mM EDTA pH 8 a 25 °C Preguntas frecuentes P: ¿El ADN Lambda (NEB n.º N3011) y el ADN Lambda (dam-) (NEB n.º N3013) están metilados? R: El ADN Lambda N3011 está metilado, pero no sabemos exactamente qué sitios A y C se metilan, ya que la metilación en Lambda no es del 100 %. El ADN se extrae de una E. coli dam+, dcm+, EcoK+ (cepa C190). NEB también ofrece ADN Lambda (dam-) (NEB n.º N3013), que se cultiva en una cepa de E. coli que es dam-, dcm+, EcoK+ (cepa GM33). La metilasa codificada por el gen dam (Dam metilasa) transfiere un grupo metilo a la posición N6 de los residuos de adenina en la secuencia GATC (1,2). La metilasa Dcm, codificada por el gen dcm, metila los residuos internos de citosina en las secuencias CCAGG y CCTGG (1,3) en la posición C5. La metilasa EcoKI, M.EcoKI, modifica los residuos de adenina en las secuencias AAC(N6)GTGC y GCAC(N6)GTT. Para más información, consulte: https://www.neb.com/tools-and-resources/selection-charts/dam-dcm-and-cpg-methylation No todo el ADN aislado de E. coli está metilado en la misma medida. Aunque el ADN pBR322 está completamente modificado, solo alrededor del 50% de los sitios de represa del ADN Lambda están metilados, presumiblemente porque la metilasa no tiene la oportunidad de metilar el ADN completamente antes de que se empaquete en la cabeza del fago. 1. Marinus, MG y Morris, NR (1973) J. Bacteriol. 114, 1143–1150. PMID: 4576399 2. Geier, GE y Modrich, P. (1979) J. Biol. Chem. 254, 1408–1413. PMID: 368070 3. May, MS y Hattman, S. (1975) J. Bacteriol. 123, 768–770. PMID: 1097428 P: ¿Cuáles son los extremos cohesivos del ADN Lambda? A: El ADN Lambda tiene 12 bases, salientes monocatenarios que son complementarios. Sus secuencias son: 5' GGGCGGCGACCT 3' y 5' AGGTCGCCGCCC 3' P: ¿Su ADN Lambda es lineal o circular? R: Nuestro ADN lambda es lineal. No vendemos ADN Lambda en forma circular. Teóricamente, podría ligarse para formar círculos pero, debido a su gran tamaño, es difícil de lograr. La probabilidad de que los extremos de varias moléculas de ADN Lambda separadas se encuentren es mucho mayor que la de una sola pieza de ADN Lambda plegándose sobre sí misma, a menos que la solución esté muy diluida. P: ¿Cuáles son las mutaciones en su ADN lambda? R: Nuestro ADN Lambda contiene un total de 4 mutaciones: -ind1 en 37,589 C->T, que crea un sitio Hind III en 37,584. -Sam7 en 45,352 G->A. Sam7 es una mutación ámbar en un gen implicado en la lisis de la membrana celular bacteriana. La ausencia de un producto del gen S de tipo silvestre provoca la acumulación intracelular de partículas bacteriófagas infecciosas. -cI857 a 37.742 °C->T. cI857 es una mutación termosensible que hace que el producto del gen CI sea termolábil. La cepa -cI857s7 también presenta una mutación G->A a 43.082 °C. P: ¿Cuál es la secuencia de ADN de este producto? R: La secuencia de ADN se puede encontrar en la herramienta de secuencias y mapas de ADN.