New England Biolabs, N3239S, Quick-Load® 1 kb Extend DNA Ladder

Categorías relacionadas Marcadores y escaleras de ADN Aplicaciones Análisis de ADN Especificación Bases Fragmento Masa (ng) pb 1 30 48.502 2a 15 20.066 2b 15 19.871 3 45 15.000 4 33 10.002 5 33 8.001 6 40 6.001 7 33 5.001 8 26 4.001 9 100 3.001 10 37 2.000 11 27 1.500 12 33 1.000 13a 18 517 13b 17 500 Preparación El ADN bicatenario se digiere completamente con enzimas de restricción apropiadas, se extrae con fenol y se equilibra en un tampón de almacenamiento. Rango de tamaño efectivo: 500 pb a 48 502 pb. Tampón de almacenamiento: 2,5 % de Ficoll®-400, 11 mM de EDTA, 3,3 mM de Tris-HCl, 0,017 % de SDS, 0,015 % de azul de bromofenol, pH 8 a 25 °C. Preguntas frecuentes: P: ¿Por qué aparecen las bandas de escalera de ADN en mi Southern blot? ¿Cuál es la secuencia o composición de las bandas de escalera? R: Este fenómeno se ha observado en diversos laboratorios y, si bien no tenemos una explicación definitiva, existen dos posibles causas de la aparentemente improbable hibridación de la sonda del usuario con el ADN de la banda de escalera. Una de ellas es que, si la sonda se generó a partir de un plásmido basado en pUC o pBR, podría existir un bajo nivel de contaminación plasmídica en la sonda que hibrida con las bandas de la escalera, la mayoría de las cuales contienen secuencias similares a pUC. Alternativamente, podría existir una homología aleatoria de baja especificidad entre la sonda y algún segmento de los fragmentos de la escalera. Las bandas están compuestas íntegramente por ADN derivado de pUC o ADN de adenovirus 2, que se utiliza como ADN de relleno para generar plásmidos del tamaño adecuado para los marcadores. Dado que la cantidad molar de ADN en las bandas de la escalera suele ser muy superior a la del ADN que se está sondeando, incluso una homología relativamente baja puede resultar en una incorporación suficiente de la sonda para obtener una señal fácilmente detectable. P: ¿Por qué mi escalera de ADN flota fuera de los pocillos? ¿Por qué no hay bandas visibles en mi carril de gel de escalera de ADN? R: Si la escalera de ADN lista para cargar o el colorante de carga 6X que se incluye con la escalera se ha congelado en algún momento, el Ficoll formará un gradiente de densidad en el vial al descongelarse. Cualquier volumen pipeteado desde la parte superior del vial contendrá solo una pequeña cantidad de agente densificador y flotará fuera de los pocillos. Para evitar esto, mezcle bien al recibirlo y antes de usarlo.