New England Biolabs, P0735S, Bacteroides heparinasa I

La heparinasa I, también llamada heparina liasa I, es activa sobre la heparina y los dominios altamente sulfatados del heparán sulfato. La reacción produce oligosacáridos que contienen ácidos urónicos insaturados, detectables mediante espectroscopia UV a 232 nm. Categorías relacionadas: Heparinasas, Aplicaciones , Análisis de heparina/HS, Especificación, Unidad, Definición. Una unidad se define como la cantidad de enzima que libera 0,25 nmol de oligosacáridos insaturados de la heparina de la mucosa porcina por minuto a 30 °C y pH 7,0 en un volumen total de reacción de 100 μl. Condiciones de reacción Tampón de reacción de heparinasa de Bacteroides 1X Incubar a 30 °C Tampón de almacenamiento Tris-HCl 20 mM NaCl 100 mM CaCl2 5 mM EDTA 1 mM pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 100 °C durante 1 minuto Peso molecular aparente: 42 kDa Unidad Condiciones del ensayo Se incuban diluciones dobles de heparinasa I de Bacteroides con 1 mg/ml de sustrato de heparina de mucosa porcina en tampón de reacción de heparinasa de Bacteroides 1X, en una reacción de 100 μl. La mezcla de reacción se incuba a 30 °C. La liberación de oligosacáridos insaturados se detecta mediante espectroscopia UV en tiempo real a 232 nm. Preguntas frecuentes P: ¿Qué son las enzimas heparinasa de Bacteroides? R: Las heparinasas, también llamadas enzimas heparina liasa, son enzimas que escinden el enlace glucosídico entre las hexosaminas y los ácidos urónicos, y se sabe que escinden selectivamente las cadenas de heparina y HS mediante un mecanismo de eliminación. Las enzimas heparinasas crean un doble enlace en el extremo no reductor del ácido urónico que absorbe a 232 nm y puede utilizarse para la detección de oligosacáridos y disacáridos. P: ¿Cuál es la diferencia entre las heparinasas I, II y III de Bacteroides? R: La heparinasa I escinde las cadenas de heparina/HS altamente sulfatadas, la heparinasa III escinde las cadenas de HS menos sulfatadas, mientras que la heparinasa II escinde dominios de alta y baja sulfatación tanto en la heparina como en el HS. La combinación de las heparinasas I, II y III puede producir una despolimerización casi completa de las cadenas de polisacáridos de heparina/HS a disacáridos. P: ¿Se pueden usar las heparinasas I, II y III de Bacteroides juntas en una misma digestión? R: Sí, las tres enzimas heparinasas se suministran con el mismo tampón de reacción (la formulación 1X consiste en 20 mM de TrisHCl, pH 7, 100 mM de NaCl y 1,5 mM de CaCl₂) y su temperatura de incubación óptima es de 30 °C. P: ¿Cuál es el rango de pH óptimo para la heparinasa I de Bacteroides? R: La heparinasa I de Bacteroides presenta su máxima actividad entre pH 6,5 y 7,5. P: ¿Se activa la heparinasa I de Bacteroides con el calcio? R: Sí, la heparinasa I de Bacteroides tiene 1,5 veces más actividad en presencia de 1,5 mM de CaCl₂ que de 0,5 mM de CaCl₂. Por este motivo, tanto el tampón de almacenamiento como el de reacción contienen calcio.