New England Biolabs, P0753L, Proteína fosfatasa lambda (Lambda PP)

La fosfatasa de proteína lambda es una Mn Categorías relacionadas Fosfatasas de proteínas Aplicaciones Fosfatasas de proteínas y quinasas Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima que hidroliza 1 nmol de fosfato de p-nitrofenilo (50 mM) (NEB #P0757) en 1 minuto a 30 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer Pack para metalofosfatasas proteicas (PMP) Suplemento con 1 mM de MnCl2 Incubar a 30 °C 1X NEBuffer Pack para metalofosfatasas proteicas (PMP) 50 mM HEPES 100 mM NaCl 2 mM DTT 0,01 % Brij 35 (pH 7,5 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 50 mM HEPES 100 mM NaCl 2 mM DTT 0,01 % Brij 35 0,1 mM EGTA 0,1 mM MnCl2 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 60 minutos Peso molecular Teórico: 25 kDa Actividad específica 800 000 unidades/mg Notas de almacenamiento Evitar ciclos repetidos de congelación/descongelación. Notas de envío Envíos en hielo seco Preguntas frecuentes P: ¿Puede recomendar un tampón de lisis celular que sea compatible con la proteína fosfatasa Lambda (NEB n.º P0753)? R: La proteína fosfatasa Lambda (Lambda PP) es muy sensible a diferentes tampones de reacción. El SDS en cualquier concentración inhibe la enzima. Idealmente, el tampón de lisis debe tener la composición más cercana al tampón óptimo recomendado para Lambda PP, que es: Tampón NE 1X para PMP: HEPES 50 mM, NaCl 100 mM, DTT 2 mM, Brij-35 al 0,01 %, pH 7,5, suplementado con MnCl2 1 mM. Estos tampones se suministran con la enzima. El tampón de lisis ideal también puede contener cualquier detergente no iónico suave, como NP-40 al 1 % o Triton X-100. Si el tampón PMP no es ideal, otro tampón de lisis recomendado es: 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 1 µg/ml leupeptina, pH 7,5.