New England Biolabs, P6000L, proteína quinasa dependiente de AMPc (PKA), subunidad catalítica

Categorías relacionadas Aplicaciones de las proteínas quinasas Fosfatasas y proteínas quinasas Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de subunidad catalítica de PKA necesaria para catalizar la transferencia de 1 pmol de fosfato a Kemptide, LRRA S LG (100 µM) en 1 minuto a 30 °C en un volumen de reacción total de 25 μL. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ para proteinas quinasas (PK) Suplemento con 200 µM de ATP Incubar a 30 °C 1X NEBuffer™ para proteinas quinasas (PK) 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 0,1 mM EGTA 2 mM DTT 0,01 % Brij 35 (pH 7,5 a 25 °C) Tampón de almacenamiento 20 mM Tris-HCl 50 mM NaCl 2 mM DTT 1 mM EDTA 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Peso molecular Teórico: 38 kDa Preguntas frecuentes P: ¿Cuánta proteina quinasa dependiente de AMPc (NEB# P6000) se debe utilizar? R: La cantidad de enzima necesaria varía cuando se utilizan diferentes sustratos. Comenzar con 1-2 µl para 1 µg de proteína durante una hora en una reacción de 10-25 µl. Si aún queda material sin fosforilar, dejar que la reacción continúe durante la noche. P: ¿Cuál es la secuencia consenso para PKA (P6000)? R: La secuencia consenso es RRXS/TY, donde Y tiende a ser un residuo hidrofóbico. Una fenilalanina en las secuencias cercanas tiende a ser un determinante negativo para la fosforilación por PKA.