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BRAND / VENDOR: New England Biolabs

New England Biolabs, P8100S, Endoproteinasa GluC

CATALOG NUMBER: P8100S
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Product Description
Categorías relacionadas Proteasas,, Análisis del proteoma Aplicaciones Glicómica y glicoproteómica,, Bioterapéutica y análisis de anticuerpos,, Digestión de proteínas Especificación Condiciones de reacción Tampón de reacción 1X GluC Incubar a 37 °C Tampón de reacción 1X GluC 50 mM Tris-HCl 0,5 mM Glu-Glu (pH 8 a 25 °C) Concentración de uso 100 ng/μl Peso molecular Teórico: 29849 daltons Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la estabilidad/compatibilidad de la endoproteinasa GluC con respecto a la presencia de DTT, urea, concentraciones de metanol, acetonitrilo, nitrosoguanidina, tiourea y glicerol? R: GluC no tiene cisteínas y, por lo tanto, no se ve afectada por DTT. GluC tiene una actividad reducida en presencia de glicerol. La urea 4M desnaturalizará la GluC. Cualquier desnaturalización debe realizarse con un breve tratamiento térmico, como 95 °C durante 1 minuto. Si es necesaria urea 4M, úsela para desnaturalizar la proteína sustrato y luego diluya la reacción de 10 a 100 veces antes de la digestión con GluC. GluC puede tolerar niveles bajos de nitrosoguanidina o tiourea; sin embargo, ambos son agentes caotrópicos y pueden tener que probarse empíricamente. GluC es compatible con metanol o acetonitrilo al 10-20 %; sin embargo, se recomienda acetonitrilo sobre metanol. Al usar soluciones orgánicas con GluC, los resultados pueden variar según el sustrato proteico. P: ¿Cómo se realizan experimentos de proteólisis limitada con tripsina y endoproteinasa Glu-C? ¿Qué productos químicos se pueden usar para extinguir las reacciones en puntos de tiempo determinados para monitorear el progreso de la proteólisis mediante SDS-PAGE? R: Aunque ambas enzimas tienen inhibidores químicos específicos, la forma más sencilla de detener la reacción (si se van a analizar mediante SDS-PAGE) es añadir tampón de carga de SDS e incubar durante 3 minutos a 95 °C. La glucina y la tripsina también se inactivan reduciendo el pH de la reacción a 3. Para inhibirlas químicamente, utilice TLCK o PMSF para la tripsina y 3,4-dicloroisocumarina para la glucina. Sin embargo, la reacción de la 3,4-dicloroisocumarina con la glucina es parcialmente reversible y puede ser incompleta. Por lo tanto, la desnaturalización con SDS es la mejor opción para el análisis en gel y se recomienda añadir ácido fórmico al 0,1 % antes del análisis MS/MS. En general, los inhibidores químicos son tóxicos, inestables y no son tan eficaces.

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