New England Biolabs, P8109S, Endoproteinasa LysC

La endoproteinasa LysC es una endoproteinasa de serina que escinde enlaces peptídicos en el lado carboxilo de la lisina. La LysC es una enzima de grado de secuenciación y es adecuada para aplicaciones de proteómica y glicobiología. Categorías relacionadas Proteasas, Aplicaciones de análisis de proteomas Glicómica y glicoproteómica, Bioterapéutica y análisis de anticuerpos, Digestión de proteínas, Especificación Uso Concentración 100 ng/μl Peso molecular Aparente: 30000 daltons Preguntas frecuentes P: ¿En qué condiciones de tampón se puede utilizar la endoproteinasa LysC? ¿Hay alguna aplicación especial para la que la LysC sea especialmente buena? R: La LysC es activa en un amplio rango de pH y también puede funcionar bajo alguna desnaturalización, p. ej., urea de hasta 5-8 M. Por esta razón, la enzima se utiliza a menudo en proteínas o mezclas de proteínas difíciles de digerir. Normalmente, se utiliza un rango de pH de tampón entre 7 y 9. La endoproteinasa LysC se puede utilizar en condiciones de tampón ácido, incluyendo acetato de sodio 20 mM, pH 4,5-6,5. P: ¿Cuánta endoproteinasa LysC necesito realmente para digerir mi proteína? R: Recomendamos una relación LysC:sustrato de 1:50-100. Sin embargo, hemos observado productos de digestión significativos utilizando tan solo 1:250. Una búsqueda en bases de datos reveló una cobertura de secuencia del 65% para este último y > 80% para el primero. P: ¿Puede utilizarse la endoproteinasa LysC en una digestión doble con Trypsin-ultra? R: Se ha descubierto que las codigestiones de tripsina-LysC mejoran la cobertura de proteínas en estudios proteómicos, especialmente entre proteínas de baja abundancia. Se han utilizado con éxito muchas condiciones diferentes. Consulte las referencias a continuación para obtener información más detallada. Una buena digestión estándar de tripsina-LysC consiste en preparar una digestión con LysC en tampón de urea 8 M durante 4 horas a 37 °C y, a continuación, diluir a urea 1,5 M para una digestión con tripsina durante 4 horas a 37 °C. Ambas digestas deben tener una proporción de proteasa a sustrato de 1:20-50. Referencias: Giansanti, P. et al., 2016, «Seis proteasas alternativas para la proteómica basada en espectrometría de masas más allá de la tripsina», Natur Protoc. 11, 993-1006. Swaney, DL et al., 2010, «El valor del uso de múltiples proteasas para la proteómica basada en espectrometría de masas a gran escala», J. Proteome Res. 9, 1323-1329. Wang, Y. et al 2016 “Desarrollo de un método de preparación de muestras para monitorear enlaces disulfuro correctos de anticuerpos monoclonales mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas” Anal. Biochem. 495, 21-28. P: ¿Puede usarse la endoproteinasa LysC en condiciones de tampón ácido? R: Sí, la endoproteinasa LysC puede usarse en condiciones de tampón ácido. Se ha observado una escisión robusta que produce los productos en los siguientes tampones: acetato de sodio 20 mM pH 4,5 acetato de sodio 20 mM pH 5,5 acetato de sodio 20 mM pH 6,0 acetato de sodio 20 mM pH 6,5 Las digeridas también pueden ejecutarse en tampón Tris dentro de un rango de pH de 7,0 - 9,1.