New England Biolabs, P8118S, proteasa TEV activa en frío

Categorías relacionadas Herramientas para proteínas, Proteasas, Aplicaciones de purificación de proteínas Escisión de proteínas de fusión, Herramientas de análisis de proteínas Especificación Unidad Definición Una unidad de proteasa TEV activa en frío escindirá 2 µg de proteína de fusión MBP, MBP5-TEV-paramiosina ΔSal, hasta un 95 % de finalización en un volumen total de reacción de 10 μl en 5 horas a 4 °C en 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 a 25 °C) con 0,5 mM EDTA y 1 mM DTT. Temperatura de almacenamiento: -20 °C. Condiciones de reacción Tampón de reacción de proteasa TEV 1X Incubar a 4 °C Tampón de reacción de proteasa TEV 1X Tris-HCl 50 mM EDTA 0,5 mM DTT 1 mM (pH 7,5 a 25 °C) Tampón de almacenamiento Tris-HCl 50 mM NaCl 250 mM TCEP 1 mM EDTA 50 % glicerol pH 7,5 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 10 minutos Peso molecular aparente: 28 kDa Preguntas frecuentes P: ¿Puedo usar proteasa TEV activa en frío (NEB n.º P8118) durante la diálisis de mi proteína de fusión? R: Sí. La proteasa TEV activa en frío se puede añadir a una muestra antes o durante la diálisis siempre que los dos tampones sean compatibles con la actividad de la proteasa TEV activa en frío. P: ¿Se puede usar la proteasa TEV activa en frío (NEB n.° P8118) a temperaturas superiores a 4 °C? R: Sí. La proteasa TEV activa en frío se puede usar a temperaturas entre 4 °C y 37 °C. El tiempo de incubación de la reacción puede reducirse al aumentar la temperatura de incubación. P: ¿Puedo inactivar la proteasa TEV activa en frío (NEB n.° P8118) una vez finalizada la reacción? R: Sí. La proteasa TEV activa en frío se puede inactivar por calor incubando la reacción a 65 °C durante 10 minutos. P: ¿Puede la proteasa TEV activa en frío (NEB n.° P8118) escindir una proteína de fusión unida a una columna de afinidad? R: Si bien hemos demostrado con éxito que la proteasa TEV activa en frío puede escindir una etiqueta de una proteína marcada inmovilizada en una resina de afinidad, recomendamos probar primero la reacción de escisión en la proteína de fusión eluida de la columna de afinidad para determinar las mejores condiciones. P: ¿Debo dializar mi reacción antes de la escisión con la proteasa TEV activa en frío (NEB n.° P8118)? R: Recomendamos dializar la proteína de fusión si el tampón contiene > 2 M de urea, > 1 M de clorhidrato de guanidina, > 30 % de glicerol, valores de pH inferiores a 6 o superiores a 9, o inhibidores de la cisteína proteasa. P: ¿Cuál es la diferencia entre la proteasa TEV activa en frío (NEB n.° P8118) y la proteasa TEV (NEB n.° P8112)? R: La proteasa TEV activa en frío está diseñada para una mayor actividad, especialmente a temperaturas más bajas. Nuestros datos muestran que la proteasa TEV activa en frío es tres veces más rápida que la proteasa TEV a 4 °C y a temperaturas superiores. Ambas enzimas pueden utilizarse en el mismo tampón de reacción de proteasa TEV 1X y pueden inactivarse a 65 °C durante 10 minutos.