Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0124S, HinP1I

HinP1I se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10152650. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción HM,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 100 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam metilación: No sensible metilación dcm: No sensible Metilación de CpG: Bloqueada Preguntas frecuentes P: ¿Cómo se compara Hinp1I con HhaI? R: HinP1I se escinde para dejar un saliente diferente. HinP1I produce una extensión 5', mientras que HhaI produce una extensión 3'. La extensión 5' se puede ligar eficientemente en el sitio AccI de los vectores de clonación M13 y pUC. Ambos están bloqueados por la metilación de CpG. P: ¿HinPI escinde ADN monocatenario? R: Sí, aproximadamente a la mitad de su velocidad en ADN bicatenario. No está claro si la enzima corta ADN monocatenario o en regiones bicatenarias en ADN monocatenario. P: ¿Cuál es la actividad de Hinp1I a 25 °C? R: HinPI tiene una actividad de aproximadamente el 25 % a 25 °C frente a 37 °C. P: ¿Tengo que preparar las digestiones con enzimas con certificación Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5-15 minutos), pero también están diseñadas y certificadas para soportar digestiones nocturnas sin degradar el ADN. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de DAM, DCM o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que están bloqueados por la metilación de CpG. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-DCM y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los NEBuffers? A: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.