Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0140T, PstI

Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción PR,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones BioBrick, ®, Ensamblaje,, Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB Definición de unidad de especificación Una unidad se define como la cantidad de PstI necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 75 % NEBuffer™ r2.1: 75 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 50 % Compatibilidad del diluyente Diluyente C Tampón de almacenamiento 250 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol 0,15 % Triton® X-100 pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam methylation: No sensible dcm methylation: No sensible CpG Metilación: No sensible Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de PstI a 25 °C? R: PstI tiene una actividad del 50-75 % a 25 °C. P: ¿Se utiliza PstI en técnicas especiales? R: Sí, PstI se utiliza para la tipificación de ADN. P: ¿Cuándo es un problema la actividad estrella para PstI? R: Condiciones de pH alto, baja sal, alto glicerol; 8 % DMSO puede causar actividad estrella. (Malyguine et al. (1980). Gene 8: 163-177). P: ¿Cuál es el peso molecular de PstI? R: El peso molecular de PstI es de 37,37 kDa según los datos de secuencia. P: ¿La metilación bloquea a PstI? R: PstI no se bloquea con la metilación Dam, Dcm ni CpG. Sin embargo, sí se bloquea con ciertos tipos de metilación que a veces se encuentran en el ADN vegetal. Las plantas suelen presentar metilación CAG o CTG que conduce a sitios MTG o MAG. Donde M es 5mC. PstI se bloquea con este tipo de metilación. No es lo mismo que la metilación CpG (MG en lugar de MTG y MAG). Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación CpG o REBASE. PstI tampoco corta AGCTGCAG cuando es metilado por la metilasa AluI. P: ¿Inhibe PstI la incorporación de dUTP en el sitio? R: Sí. La incorporación del 100 % de dUTP reduce la escisión de PstI al 25 %. Glenn et al. (1994). Biotechniques 17: 1086-1090. P: ¿La espermidina aumenta la actividad? R: No, 0,5-2 mM de espermidina inhibe la digestión por PstI (Kuosmanen y Poso (1985). FEBS Lett. 179: 17-20. La espermidina suprime la actividad estrella de PstI (Pingoud (1985). Eur. J. Biochem. 147:150-109. P: ¿Existen secuencias circundantes específicas que produzcan sitios lentos o resistentes? R: La presencia de series adyacentes de pares de bases GC confiere una resistencia significativa a la escisión. Armstrong y Bauer (1982). NAR 10: 993-1007. P: ¿Tengo que configurar las digestiones con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestiones durante la noche sin degradación del ADN. P: ¿Qué ¿Las enzimas de restricción NEB se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción HF y la mayoría de las enzimas de restricción NEB no HF se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con colorante de carga de gel, púrpura (6X). P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.