Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0145L, XbaI

Reactivo de grado GMP también disponible. Categorías relacionadas: Endonucleasas de restricción TZ, Enzimas de restricción cualificadas que ahorran tiempo, Aplicaciones: BioBrick, ®, Ensamblaje, Clonación rápida: Acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Especificación de digestión con enzimas de restricción. Definición de unidad: Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ (digestión de dam-/HindIII) en 1 hora a 37 °C en un volumen total de reacción de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: <10 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 75 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 @ 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: bloqueada por superposición Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: no sensible Preguntas frecuentes P: ¿XbaI se ve afectada por la metilación? R: XbaI se bloquea por superposición de metilación de dam. Si el sitio de reconocimiento de XbaI está precedido por GA o seguido por TC, la metilasa Dam dentro de la mayoría de las cepas de clonación de E. coli metilará el sitio GATC. Por ejemplo, los sitios XbaI gaTˆCTAGA y TˆCTAGAtc se bloquearán por la metilación. Para evitar la metilación de dam, utilice una cepa deficiente en dam, como E. coli competente en dam-/dcm (#C2925). Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Tengo que preparar las digestivas con enzimas con certificación Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5-15 minutos), pero también están diseñadas y certificadas para soportar digestivas nocturnas sin degradación del ADN. P: ¿Qué enzimas de restricción de NEB se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción con HF y la mayoría de las enzimas de restricción de NEB sin HF se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: ¿NEB ofrece alguna ¿Enzimas de restricción libres de BSA y/o de origen animal para la linealización de plásmidos para el desarrollo de vacunas de ARNm? R: Sí, NEB ha formulado algunas enzimas de restricción (incluyendo BspQI, un isoesquizómero de SapI) sin componentes derivados de animales y no aparece BSA en su formulación final. Además, tenemos varias enzimas de restricción disponibles sin BSA ni otros componentes derivados de animales en su formulación final. Esta lista incluye: BbsI-HF BsaI-HFv2 BspQI, isoesquizómero de LguI, grado GMP* ahora disponible BspQI-HF ClaI HindIII-HF PacI SapI SpeI SwaI XbaI XhoI XmnI Se pueden formular otras enzimas a pedido. Por favor, pregunte aquí. * "Grado GMP" y "grado GMP" son términos de marca que NEB utiliza para describir los productos fabricados o terminados en las instalaciones de Rowley de NEB. Las instalaciones de Rowley fueron diseñadas para fabricar productos bajo una infraestructura y controles de proceso más rigurosos para lograr especificaciones de producto y requisitos de los clientes más estrictos. Los productos fabricados en las instalaciones de NEB en Rowley se fabrican de conformidad con las normas de gestión de calidad ISO 9001 e ISO 13485. Sin embargo, actualmente, NEB no fabrica ni vende productos conocidos como Ingredientes Farmacéuticos Activos (API), ni fabrica sus productos de conformidad con todas las normas vigentes de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM). P: ¿Podrían darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEBuffer? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de migrar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: ¿Se puede almacenar el colorante de carga en gel, morado 6X (B7024) a bajas temperaturas? R: La temperatura de almacenamiento recomendada para el colorante de carga en gel, morado 6X, es la temperatura ambiente (25 °C). Es común que la SDS se precipite de la solución cuando el colorante se almacena a bajas temperaturas. Este ligero precipitado se puede disipar dejando el vial a temperatura ambiente durante una hora o calentándolo suavemente durante 10 minutos. Mezcle el vial varias veces antes de usarlo para homogeneizar la solución.