Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0146M, XhoI

XhoI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10161948. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción TZ,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de fragmentos de ADN λ (digestión con HindIII) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 75 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam metilación: No sensible dcm metilación: No sensible Metilación de CpG: Deteriorada Preguntas frecuentes P: ¿Por qué XhoI no corta? R: 1. Bloqueado por la metilación de CpG. 2. Los plásmidos superenrollados pueden requerir hasta 10 veces más XhoI para una digestión completa que el ADN lineal. P: ¿XhoI produce extremos compatibles de uso común? R: XhoI se escinde para dejar un saliente 5' que puede ligarse a fragmentos generados por la digestión con SalI y AvaI. P: ¿En qué se diferencia XhoI de su isoesquizómero, PaeR71? R: La secuencia de escisión de XhoI es idéntica a la de PaeR71. Sin embargo, se ha determinado experimentalmente que la secuencia ctCTCGAG es resistente a la escisión por PaeR71. XhoI puede inactivarse por calor, mientras que PaeR71 no. Ambos se bloquean mediante la metilación de CG. P: ¿Cuál es el peso molecular de XhoI? R: El peso molecular de XhoI es de 26 kDa según la estimación de PAGE. P: ¿Cuál es la actividad de XhoI a 25 °C? R: XhoI tiene una actividad del 50-75 % a 25 °C. P: ¿Tengo que preparar las digestiones con enzimas cualificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5-15 minutos), pero también están diseñadas y cualificadas para soportar digestiones nocturnas sin degradación del ADN. P: ¿Qué enzimas de restricción de NEB se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción con HF y la mayoría de las enzimas de restricción de NEB que no son HF se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: ¿Esta enzima es sensible a ¿Metilación de dam, dcm o CpG en mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que se ven afectados por la metilación de CpG. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Ofrece NEB enzimas de restricción sin BSA ni de origen animal para la linealización de plásmidos para el desarrollo de vacunas de ARNm? R: Sí, NEB ha formulado algunas enzimas de restricción (incluida BspQI, un isoesquizómero de SapI) sin componentes de origen animal y su formulación final no contiene BSA. Además, disponemos de varias enzimas de restricción sin BSA ni otros componentes de origen animal en su formulación final. Esta lista incluye: BbsI-HF BsaI-HFv2 BspQI, isoesquizómero de LguI, grado GMP* ahora disponible BspQI-HF ClaI HindIII-HF PacI SapI SpeI SwaI XbaI XhoI XmnI Se pueden formular otras enzimas a pedido. Consulte aquí. * “Grado GMP” y “grado GMP” son términos de marca que NEB usa para describir productos fabricados o terminados en las instalaciones de NEB en Rowley. Las instalaciones de Rowley fueron diseñadas para fabricar productos bajo controles de infraestructura y procesos más rigurosos para lograr especificaciones de producto y requisitos de los clientes más estrictos. Los productos fabricados en las instalaciones de NEB en Rowley se fabrican de conformidad con los estándares del sistema de gestión de calidad ISO 9001 e ISO 13485. Sin embargo, en este momento, NEB no fabrica ni vende productos conocidos como Ingredientes Farmacéuticos Activos (API), ni NEB fabrica sus productos de conformidad con todas las regulaciones actuales de Buenas Prácticas de Manufactura. P: ¿Podrían contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar la transición de los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: ¿Se puede almacenar el colorante de carga de gel, púrpura 6X (B7024) a bajas temperaturas? R: La temperatura de almacenamiento recomendada para el colorante de carga de gel, púrpura 6X, es temperatura ambiente (25 °C). Comúnmente, el SDS puede precipitarse de la solución cuando el tinte se almacena a bajas temperaturas. Este ligero precipitado puede disiparse dejando el vial a temperatura ambiente durante una hora o calentándolo suavemente durante 10 minutos. Mezcle el vial varias veces antes de usarlo para homogeneizar la solución.