Laboratorios Biológicos de Nueva Inglaterra, R0149T, TaqI-v2

Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción TZ,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB,, Definición de unidad de especificación de digestión con enzimas de restricción Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de ADN λ en 1 hora a 65 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 65 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 50 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Albúmina recombinante 500 µg/ml Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor Sin sensibilidad a la metilación Metilación de la presa: bloqueada por la superposición de metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: no sensible Actividad a temperatura a 37 °C: 10 % Preguntas frecuentes P: ¿Por qué TaqI-v2 no corta? R: 1. Podría verse inhibido por algunas impurezas de la minipreparación. Diálisis por gotas o lavado con etanol. 2. Se bloquea por la superposición de metilación de la presa. 3. Los productos de PCR pueden ser resistentes a la escisión. Purifique el ADN. 4. La incubación sin BSA da como resultado una actividad del 50 %. 5. La incubación a 37 °C da como resultado una actividad del 10 %. P: ¿Un cierto rango de pH inhibe la actividad de TaqI-v2? R: Sí, la actividad disminuye si el pH del tampón de reacción no está entre 7,5 y 8,5. P: ¿TaqI-v2 reconoce varios sitios? R: La enzima puede reconocer desajustes A/C o G/T (NAR 14: 459-6590: 1943-1949 (1986) Jiricny, J. Martin, D.). Los sitios estrella son una diferencia de un solo par de bases (Gene 65: 149-165, (1988) Barany, F.). P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento bloqueados por la metilación de dam superpuesta. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Puede contarme más sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en NEBuffers? A: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.