Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0154S, HgaI

HgaI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10274062. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción Aplicaciones de HM Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN ΦX174 en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r1.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r1.1 10 mM Bis-Tris-Propano-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 100 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 25 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 50 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 50 % Glicerol 200 µg/ml Albúmina recombinante pH 7,4 a Inactivación por calor a 25 °C 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: no sensible Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: bloqueada Preguntas frecuentes P: ¿La actividad de HgaI es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Es posible que HgaI no corte los sitios de reconocimiento en el gDNA de mamíferos que contienen metilación de CpG. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades de metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Cuántos pares de bases se deben agregar al final de un cebador de PCR después del sitio de reconocimiento de HgaI para garantizar que HgaI corte correctamente? R: Se recomienda la adición de 6 pares de bases a 5' del sitio de reconocimiento. P: ¿HgaI tiene neoesquizómeros? R: No. Para obtener la información más actualizada sobre isoesquizómeros/neoesquizómeros, consulte REBASE. P: ¿HgaI exhibe actividad estrella? R: En ciertas condiciones de reacción, como baja fuerza iónica, alta concentración enzimática, concentración de glicerol >5% o pH >8,0 HgaI, se puede presentar actividad estrella. No se recomiendan sobredigestiones con >5 unidades de HgaI por µg de ADN ni incubaciones de más de 1 hora. P: ¿Podrían darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.