Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0160S, BclI

BclI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10187673. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ ( dam - ) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 50 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 75 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 50 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a Inactivación por calor a 25 °C Sin sensibilidad a la metilación Metilación en dam: bloqueada Metilación en dcm: no sensible Metilación de CpG: no sensible Actividad a temperatura a 50 °C: 100 % Preguntas frecuentes P: ¿Cómo se puede inactivar esta enzima? R: Para inactivar enzimas que no se pueden matar con calor, recomendamos una extracción con fenol seguida de una precipitación con etanol o una columna de centrifugación comercial diseñada para purificar ADN. P: ¿Tengo que configurar las digestiones con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestiones durante la noche sin degradación del ADN. P: ¿Esta enzima es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento que están bloqueados por la metilación de dam. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEBuffer? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: ¿Son algunas enzimas de restricción más activas a temperaturas de incubación más altas que las recomendadas? R: Las enzimas de restricción NEB son 100 % activas a la temperatura de incubación recomendada en el tampón recomendado que se incluye con cada enzima. Con algunas enzimas de restricción aisladas de especies termófilas, es posible que se observe un aumento de la actividad a temperaturas de incubación más altas. No recomendamos aumentar la temperatura, ya que podrían aparecer actividades nucleasas adicionales a temperaturas no recomendadas.