Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0163L, MnlI

MnlI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10161943. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción HM,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB,, Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 75 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam methylation: No sensible dcm methylation: No sensible CpG methylation: No sensible Preguntas frecuentes P: ¿Cómo recomienda usar MnlI? R: 1. MnlI funciona mejor en ADN que se ha lavado o dializado. 2. No digerir durante más de 4 horas. 3. Si la escisión es incompleta, use más enzima. P: ¿Existe variabilidad en el sitio de escisión para MnlI? R: Parece haber un efecto de bamboleo que imita la actividad de estrella y representa un sitio de escisión variable. MnlI siempre deja un saliente 3' de una sola base. La mayoría de los sitios bajo nuestras condiciones de definición de unidad cortarán (7/6) del sitio de reconocimiento, pero se ha informado que algunos sitios cortan en (7/8) del sitio de reconocimiento. P: ¿Se ha revisado el sitio de reconocimiento o escisión para MnlI? R: Se ha revisado el sitio de corte de MnlI. Brinkly, P., Bausista, DS y Graham, FL (1991) Gene: 100. 267-268. P: ¿Escinde MnlI el ADN superenrollado? R: Se requiere el doble de MnlI para digerir puc19. P: ¿Cuál es la actividad de MnlI a 25 °C? R: Tiene una actividad del 25-50 %. P: ¿Escinde MnlI el ADN monocatenario? R: MnlI escinde el ADN monocatenario al menos un 50 % más lento. P: ¿Tengo que preparar las digestiones con enzimas con certificación Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5-15 minutos), pero también están diseñadas y certificadas para soportar digestiones nocturnas sin degradar el ADN. P: Probé su enzima de restricción en el sustrato de ADN recomendado por NEB y parece estar activa; sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden verse inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción según corresponda. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de dam, dcm ni CpG de mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Podrían darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.