Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0169S, Sau3AI

Sau3AI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10317346. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción S Aplicaciones Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r1.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r1.1 10 mM Bis-Tris-Propano-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 100 % NEBuffer™ r2.1: 50 % NEBuffer™ r3.1: 10 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 50 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a Inactivación por calor a 25 °C 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: no sensible Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: bloqueada por superposición Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la diferencia entre DpnI, DpnII, MboI y Sau3AI? R: Todos reconocen la misma secuencia, pero tienen diferentes sensibilidades de metilación. DpnI solo escindirá sitios dam completamente adenometilados y sitios dam hemi-adenometilados 60 veces más lentamente. DpnII y MboI comparten la sensibilidad a la metilación y escinden sitios dam que carecen de adenometilación; cada uno está bloqueado por la metilación completa de dam y probablemente también por la hemi-metilación. Sau3AI escindirá todos los sitios dam independientemente de la adenometilación, pero está completamente bloqueado por las citosinas metiladas dentro de la secuencia dam. P: ¿Esta enzima es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que están bloqueados por la metilación superpuesta de CpG. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (albúmina recombinante) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.