Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0176L, DpnI

DpnI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) comenzando con el lote n.º 10196884. Categorías relacionadas Enzimas de restricción sensibles a la metilación y dependientes de la metilación para epigenética,, Enzimas de restricción para análisis epigenético,, Endonucleasas de restricción CG, Aplicaciones Mutagénesis dirigida al sitio,, Mutagénesis dirigida al sitio,, Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Definición de unidad de especificación Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN pBR322 (dam metilado) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 100 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 75 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: no sensible Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: bloqueada por superposición Preguntas frecuentes P: ¿DpnI escindirá ADN hemimetilado? R: DpnI escinde sitios dam hemimetilados 60 veces más lentamente que completamente metilado. P: ¿Cuál es la diferencia entre DpnI, DpnII, MboI y Sau3AI? R: Todos reconocen la misma secuencia pero tienen diferentes sensibilidades a la metilación. DpnI solo escindirá sitios dam completamente adenometilados y sitios dam hemi-adenometilados 60 veces más lentamente. DpnII y MboI comparten la sensibilidad a la metilación y escinden sitios dam que carecen de adenometilación; cada uno está bloqueado por la metilación completa de dam y probablemente también por la hemimetilación. Sau3AI escinde todos los sitios dam, independientemente de la adenometilación, pero es completamente bloqueado por las citosinas metiladas dentro de la secuencia dam. P: ¿Debo preparar las digestiones con enzimas con certificación Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5-15 minutos), pero también están diseñadas y certificadas para soportar digestiones nocturnas sin degradación del ADN. P: ¿Qué enzimas de restricción de NEB se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción con HF y la mayoría de las enzimas de restricción de NEB sin HF se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: ¿Esta enzima es sensible a ¿Metilación de CpG en dam, dcm o mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que están bloqueados por la metilación superpuesta de CpG. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de migrar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que alejarnos de los productos que contienen ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.