Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0540S, BspEI

BspEI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10192518. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ (dam-) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: <10 % NEBuffer™ r2.1: 10 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: <10 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 300 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 500 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a Inactivación por calor a 25 °C 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: bloqueada por superposición Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: alterada Preguntas frecuentes P: ¿La actividad de BspEI es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. BspEI no puede cortar sitios de reconocimiento que contienen metilación de dam superpuesta. En el gDNA de mamíferos, BspEI no puede cortar sitios que contienen metilación de CpG. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades de metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Cuántos pares de bases se deben agregar al final de un cebador de PCR junto al sitio de reconocimiento de BspEI para garantizar que BspEI corte correctamente? R: Se recomienda la adición de 6 pares de bases. P: ¿BspEI tiene neoesquizómeros? R: No. Para obtener la información más actualizada sobre isoesquizómeros/neoesquizómeros, consulte REBASE. P: ¿Tengo que preparar las digestas con enzimas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de actuar rápidamente (5-15 minutos), pero también están diseñadas y certificadas para soportar digestaciones nocturnas sin degradar el ADN. P: ¿Pueden contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEBuffer? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de migrar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que alejarnos de los productos que contienen ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.