Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0543T, DpnII

DpnII ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10174818. Categorías relacionadas Enzimas de restricción sensibles a la metilación y dependientes de la metilación para epigenética, Enzimas de restricción para análisis epigenético, Endonucleasas de restricción CG, Aplicaciones Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB, Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ (dam-) en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ DpnII Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ DpnII 50 mM Bis-Tris-HCl 100 mM NaCl 10 mM MgCl2 0,1 mM DTT (pH 6 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 25 % NEBuffer™ r2.1: 25 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 25 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 300 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 500 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: bloqueada Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: no sensible Preguntas frecuentes P: ¿Tengo que configurar las digestiones con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestiones durante la noche sin degradación del ADN. P: ¿Esta enzima es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento que están bloqueados por la metilación de dam. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Qué enzimas de restricción de NEB se suministran con el colorante de carga de gel, púrpura (6X)? R: Todas las enzimas de restricción HF y la mayoría de las enzimas de restricción NEB no HF se suministran con colorante de carga de gel, púrpura (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: Carga de lata de gel ¿Se puede almacenar el colorante púrpura 6X (B7024) a bajas temperaturas? R: La temperatura de almacenamiento recomendada para el colorante de carga de gel púrpura 6X es la temperatura ambiente (25 °C). Es común que la SDS se desprenda de la solución al almacenar el colorante a bajas temperaturas. Este ligero precipitado se puede disipar dejando el vial a temperatura ambiente durante una hora o calentándolo suavemente durante 10 minutos. Mezcle el vial varias veces antes de usarlo para homogeneizar la solución.