Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0545S, BcgI

BcgI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10271508. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B Aplicaciones Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 75 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 50 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 50 mM KCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml Albúmina recombinante 0,32 mM S-adenosilmetionina (SAM) 50% glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam metilación: deteriorada por superposición dcm metilación: no sensible CpG metilación: bloqueada por algunas combinaciones de superposición Preguntas frecuentes P: ¿BsgI requiere SAM para la actividad? R: Sí, se requiere S-adenosilmetionina (SAM) para una actividad óptima (SAM se suministra en la formulación enzimática a partir de octubre de 2020). Si no está seguro de si SAM está en la formulación enzimática y tiene un vial de SAM de NEB, está bien agregar SAM a la reacción según las pautas anteriores. P: ¿Los extremos generados por BcgI se ligan? R: BcgI escinde un fragmento de 32 pb con salientes 3' de 2 bases. Estos salientes no son específicos, por lo que la ligabilidad de los extremos depende completamente de la secuencia de ADN específica que se esté cortando. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento afectados por la metilación de dam superpuesta o bloqueados por algunas combinaciones de metilación de CpG superpuesta. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Puede contarme más sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.