Biolabs de Nueva Inglaterra, R0568L, BfaI

BfaI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10155313. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B Aplicaciones Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: <10 % Tampón NE™ r2.1: 10 % Tampón NE™ r3.1: <10 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 @ 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam methylation: No sensible dcm methylation: No sensible CpG Metilación: No sensible Preguntas frecuentes P: ¿Funciona bien BfaI en productos de PCR? R: No. BfaI ha mostrado una escisión mínima de productos de PCR no purificados. Por lo tanto, los productos de PCR deben purificarse antes de la digestión con BfaI en 1 X rCutSmart Buffer. P: ¿Reemplaza BfaI una enzima vendida anteriormente? R: Sí, BfaI reemplaza a RmaI. P: ¿Cuál es la actividad de BfaI a 25 °C? R: BfaI tiene una actividad del 25-50 % a 25 °C. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activo, sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en NEBuffer r2.1 y/o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden ser inhibidas por la sal en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden dar como resultado soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción en consecuencia. P: ¿Los fragmentos de ADN producidos por la ADN polimerasa Vent tienen extremos romos o tienen el saliente 3' de una sola base que produce la ADN polimerasa Taq? R: La ADN polimerasa Vent genera > 95 % de fragmentos con extremos romos. Los derivados exo se parecen más a la ADN polimerasa Taq en que se observan predominantemente dos tipos de extremos: el 70 % son romos, mientras que el 30 % son predominantemente salientes 3' de una sola base. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de CpG de DAM, DCM o mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de CpG de DAM, DCM ni mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-DCM y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (albúmina recombinante) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de migrar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: En el caso de las enzimas almacenadas a -80 °C, ¿se ve afectada su actividad tras múltiples ciclos de congelación/descongelación? R: Las siguientes enzimas mantuvieron su actividad completa tras 10 ciclos de congelación/descongelación. Si necesita más de 10 ciclos de congelación/descongelación, recomendamos dividir la enzima en alícuotas más pequeñas y congelar cada alícuota a -80 °C. Cac8I EagI-HF I-SceI KasI NlaIII. Nota: FseI mantuvo su actividad completa solo durante 5 ciclos de congelación/descongelación.