Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0574S, BsrDI

Nueva temperatura de incubación de 37 °C. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB,, Definición de unidad de especificación de digestión con enzimas de restricción Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r2.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r2.1 50 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 75 % Tampón rCutSmart™: 25 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 100 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 a Inactivación por calor a 25 °C 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación en dam: no sensible Metilación en dcm: no sensible Metilación de CpG: no sensible Actividad a temperatura a 65 °C: 100 % Preguntas frecuentes P: ¿Cuál es la actividad de BsrDI a 25 °C? R: BsrDI tiene una actividad de aproximadamente el 10 % a 25 °C. P: ¿Hay sitios BsrDI individuales en vectores comunes? R: Sí, pACYC184 tiene un solo sitio BsrDI. P: ¿Tengo que configurar las digestas con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir durante más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestiones durante la noche sin degradación del ADN. P: ¿Esta enzima es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de DAM, DCM ni a la metilación de CpG de mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-DCM y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (albúmina recombinante) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: Con el fin de estandarizar las condiciones de reacción, se ha modificado la temperatura de incubación recomendada para ApaI (NEB n.° R0114), BaeI (NEB n.° R0613), BsrDI (NEB n.° R0574) y SmaI (NEB n.° R0141). ¿Qué temperatura de incubación debo usar? R: Se puede incubar con seguridad a cualquiera de las dos temperaturas. Tenga en cuenta que, para SmaI, sugerimos incubar a 25 °C si se realizan digestiones prolongadas (más de 1 hora). P: ¿Son ciertas enzimas de restricción más activas a temperaturas de incubación más altas que las recomendadas? R: Las enzimas de restricción NEB son 100 % activas a la temperatura de incubación recomendada en el tampón recomendado que se proporciona con cada enzima. Con algunas enzimas de restricción aisladas de especies termófilas, es posible que se observe un aumento de la actividad a temperaturas de incubación más altas. No recomendamos aumentar la temperatura, ya que pueden aparecer actividades nucleasas adicionales a temperaturas no recomendadas.