Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0616S, Hpy166II

Hpy166II ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) comenzando con el lote n.º 10254983. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción HM,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Especificación de digestión con enzimas de restricción Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 μg de pBR322 en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 100 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 50 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente C Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 250 mM EDTA 0,1 mM DTT 1 mM Triton® X-100 0,15 % 200 µg/ml Albúmina recombinante 50% glicerol pH 7,4 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: No sensible Metilación de dcm: No sensible Metilación de CpG: Bloqueada por solapamiento Preguntas frecuentes P: ¿Es Hpy166II una enzima cualificada para ahorrar tiempo™? R: Sí. Hpy166II digerirá 1 µg de ADN sustrato en 5 minutos utilizando 1 µl de enzima en las condiciones de reacción recomendadas. Para obtener más información, consulte Enzimas cualificadas para ahorrar tiempo™. P: ¿Es la actividad de Hpy166II sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. Hpy166II no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que contienen metilación de CpG superpuesta. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Cuántos pares de bases deben añadirse al final de un cebador de PCR junto al sitio de reconocimiento de Hpy166II para garantizar que Hpy166II corte correctamente? R: Se recomienda la adición de 6 pares de bases. P: ¿Hpy166II tiene neoesquizómeros disponibles comercialmente? R: No. Para obtener la información más actualizada sobre isoesquizómeros/neoesquizómeros, consulte REBASE. P: ¿Tengo que configurar las digestiones con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestiones durante la noche sin degradación del ADN. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activa, sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en los tampones NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden ser inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción según corresponda. P: ¿Podrían explicarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NE? A: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.