Laboratorios Biológicos de Nueva Inglaterra, R0624S, BspCNI

BspCNI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) comenzando con el lote n.º 10281541. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B,, Enzimas de restricción calificadas que ahorran tiempo Aplicaciones Clonación rápida: acelere sus flujos de trabajo de clonación con reactivos de NEB,, Digestión de enzimas de restricción Definición de unidad de especificación Una unidad de enzima escinde 1 pmol de O-glicopéptido marcado con FAM tratado con neuraminidasa en 1 hora a 37 °C. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 100 % Tampón NE™ r2.1: 75 % Tampón NE™ r3.1: 10 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM KCl 50 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM 200 µg/ml Albúmina recombinante 0,32 mM S-adenosilmetionina (SAM) 50% Glicerol pH 7.4 a 25 °C Inactivación por calor 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación dam metilación : No sensible metilación dcm: No sensible Metilación CpG: No sensible Actividad a temperatura a 25 °C: 100% Preguntas frecuentes P: ¿Tengo que configurar las digestaciones con enzimas calificadas Time-Saver™ durante 5-15 minutos? ¿Puedo digerir por más tiempo? R: Las enzimas Time-Saver™ de NEB tienen la ventaja de trabajar rápido (5-15 minutos), pero también están diseñadas y calificadas para soportar digestores nocturnos sin degradación del ADN. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB, y parece estar activo, sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores principales que pueden afectar la actividad enzimática. Enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero No tan activo en NEBuffer r2.1 y/o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), puede ser inhibido por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de reacción según corresponda. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de CpG de DAM, DCM o mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de CpG de DAM, DCM o mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-DCM y metilación de CpG o REBASE. P: ¿BspCNI requiere SAM para su actividad? R: Sí, se requiere S-adenosilmetionina (SAM) para una actividad óptima (la SAM se incluye en la formulación de la enzima a partir de octubre de 2020). Si usted... Si no está seguro de si la formulación enzimática contiene SAM y tiene un vial de SAM de NEB, puede agregar SAM a la reacción según las pautas anteriores. P: ¿Puede contarme más sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NE? R: NEB se complace en anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción que contienen BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones que contienen albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de cambiar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: ¿Son ciertas enzimas de restricción más activas a temperaturas de incubación más altas que las recomendadas? R: Las enzimas de restricción de NEB son 100 % activas a Temperatura de incubación recomendada en el tampón recomendado que se incluye con cada enzima. Con algunas enzimas de restricción aisladas de especies termófilas, es posible que se observe un aumento de la actividad a temperaturas de incubación más altas. No recomendamos aumentar la temperatura, ya que podrían aparecer actividades adicionales de nucleasas a temperaturas no recomendadas.