Laboratorios Biológicos de Nueva Inglaterra, R0626S, Nt.CviPII

Categorías relacionadas Análisis de cromatina, Endonucleasas de mellado, Endonucleasas de restricción: NO Aplicaciones Amplificación por desplazamiento de cadena y mellado Especificación de enzimas Definición de unidad Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN pUC19, lo que da como resultado un patrón estable de fragmentos entre 25 y 200 pb en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 10 % Tampón NE™ r2.1: 100 % Tampón NE™ r3.1: 25 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento Tris-HCl 20 mM NaCl 100 mM Glicerol al 50 % pH 8 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación : No Metilación de dcm sensible: No sensible Metilación de CpG: Bloqueada Preguntas frecuentes P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activo, sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores principales que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 y/o r3.1 (nuestros tampones con mayor salinidad), pueden ser inhibidas por la sal en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden dar como resultado soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN agregada a la reacción no sea más del 25% del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción como corresponda. P: ¿Esta enzima es sensible a la metilación de CpG de presa, dcm o mamíferos? R: Sí. Esta enzima no puede cortar los sitios de reconocimiento en el ADNg de mamíferos que están bloqueados por la metilación de CpG. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Pueden darme más información sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (albúmina recombinante) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos con ingredientes de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.