Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0635L, BseYI

BseYI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10227211. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B Aplicaciones Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN λ en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 50 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 50 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento 10 mM Tris-HCl 300 mM NaCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 500 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 5,4 a Inactivación por calor a 25 °C 80 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación en dam: no sensible Metilación en dcm: no sensible Metilación de CpG: bloqueada por solapamiento Preguntas frecuentes P: ¿La actividad de BseYI es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. BseYI no puede cortar sitios de reconocimiento en gDNA de mamíferos que contienen metilación de CpG superpuesta. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades de metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Cuántos pares de bases se deben agregar al final de un cebador de PCR adyacente al sitio de reconocimiento de BseYI para garantizar que BseYI corte correctamente? R: Se recomienda la adición de 6 pares de bases. P: ¿BseYI tiene isoesquizómeros? R: No. Para obtener la información más actualizada sobre isoesquizómeros/neoesquizómeros, consulte REBASE. P: Al analizar mi muestra en un gel después de digerirla con BseYI, el ADN no parece migrar correctamente. ¿Hay alguna razón? R: Sí. BseYI puede permanecer unido al sustrato de ADN después de la digestión, alterando la velocidad de migración del ADN durante la electroforesis. Para interrumpir esta unión, se puede añadir SDS al 0,5 % al tampón de carga antes de cargar la muestra en el gel. Como alternativa, se puede purificar el ADN antes de la electroforesis. P: ¿Qué enzimas de restricción NEB se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X)? R: Todas las enzimas de restricción HF y la mayoría de las enzimas de restricción NEB sin HF se suministran con el colorante de carga de gel morado (6X). Las enzimas de restricción no HF que vienen suministradas con el tinte púrpura son: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI SalI XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * Todas las enzimas de restricción HF también se suministran con tinte de carga en gel, morado (6X) P: ¿Puedes contarme más? ¿Qué opina sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: NEB se complace en anunciar la transición de los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.