Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0653L, PspOMI

PspOMI ha sido reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.° 10232252. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción Aplicaciones de PR Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN pXba en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 10 % Tampón NE™ r2.1: 10 % Tampón NE™ r3.1: <10 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 @ 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: No sensible Metilación de dcm: Deteriorada por algunas combinaciones de CpG superpuestos Metilación: Bloqueada por superposición Preguntas frecuentes P: ¿La actividad de PspOMI es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: Sí. La escisión del ADN genómico de mamíferos por PspOMI está bloqueada por la metilación de CpG. La escisión también se ve afectada por algunas combinaciones de metilación de dcm superpuesta. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades de metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Cuántos pares de bases se deben agregar al final de un cebador de PCR junto al sitio de reconocimiento de PspOMI para garantizar que PspOMI corte correctamente? R: Se recomienda la adición de 6 pares de bases. P: ¿PspOMI tiene neoesquizómeros? R: Sí. ApaI es un neoesquizómero de PspOMI. Para obtener la información más actualizada sobre isoesquizómeros/neoesquizómeros, consulte REBASE. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activo; sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden verse inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción según corresponda. P: ¿Podrían contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.