Laboratorios Biológicos de Nueva Inglaterra, R0681S, Nb.BssSI

Categorías relacionadas Endonucleasas de mella, Endonucleasas de restricción: NO Especificación Unidad Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para convertir 1 μg de ADN pUC19 superenrollado a una forma circular abierta en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción 1X NEBuffer™ r3.1 Incubar a 37 °C 1X NEBuffer™ r3.1 100 mM NaCl 50 mM Tris-HCl 10 mM MgCl2 100 µg/ml Albúmina recombinante (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en NEBuffers NEBuffer™ r1.1: 10 % NEBuffer™ r2.1: 100 % NEBuffer™ r3.1: 100 % Tampón rCutSmart™: 25 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento 300 mM NaCl 10 mM Tris-HCl 1 mM DTT 0,1 mM EDTA 500 µg/ml BSA 50 % Glicerol pH 7,4 a Inactivación por calor a 25 °C Sin sensibilidad a la metilación Metilación en presas: no sensible Metilación en dcm: no sensible Metilación en CpG: no sensible Preguntas frecuentes P: ¿El Nb.BssSI es activo a temperaturas más altas? R: El Nb.BssSI es activo a 50 °C y exhibe una actividad ~3 veces mayor a esta temperatura. P: ¿Cómo debo detener mi reacción de mellado si la enzima no puede inactivarse por calor? R: Si no se planean más manipulaciones del ADN digerido, la reacción puede terminarse agregando una solución de parada. En NEB, utilizamos la siguiente solución de parada: 50 % de glicerol, 50 mM de EDTA (pH 8,0) y 0,05 % de azul de bromofenol (reacción de 10 μl / 50 μl). La extracción con fenol/cloroformo es otro medio para inactivar una enzima de restricción. P: Probé su enzima de restricción en el sustrato de ADN recomendado por NEB y parece estar activa; sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden verse inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden pasar a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción según corresponda. P: ¿Se utilizan enzimas de corte en el sistema Irys® de BioNano Genomics®? R: Nb.BssSI y Nt.BspQI son endonucleasas de corte que cortan solo una hebra de ADN en un sustrato de ADN bicatenario. Se pueden utilizar para el mapeo genómico, el ensamblaje y la detección de SV en el sistema Irys de BioNano Genomics. Para más información, visite www.BioNanogenomics.com o contacte con BioNano en: support@bionanogenomics.com. P: ¿Cuál es la actividad de las enzimas de corte a diferentes temperaturas? R: La actividad de las enzimas de corte NEB a diferentes temperaturas se puede consultar en la tabla "Efecto de varias temperaturas en las endonucleasas de corte". P: ¿Puedo comprar grandes cantidades de una enzima para innovación existente? R: Sí, si necesita grandes cantidades de una enzima para innovación, contacte con NEB en EnzymesForInnovation@neb.com. Tenga en cuenta que la disponibilidad puede ser limitada y, por lo tanto, se requieren plazos de entrega más largos para pedidos grandes. También podrían ser necesarias pruebas de control de calidad adicionales para satisfacer sus necesidades y aplicaciones específicas. P: ¿Qué son las Enzimas para la Innovación? R: Enzimas para la Innovación (EFI) es un proyecto iniciado por NEB para proporcionar enzimas únicas a la comunidad científica con la esperanza de facilitar el descubrimiento de aplicaciones nuevas e innovadoras. Estas enzimas poseen propiedades interesantes y especificidades únicas que no están disponibles comercialmente en otros lugares con la calidad que se espera de NEB. Las enzimas graduadas de Enzimas para la Innovación han pasado de tener aplicaciones desconocidas o exploratorias a convertirse en la piedra angular de una aplicación definida. Si tiene una idea para una "Enzima para la Innovación" con una aplicación sugerida que pueda ser útil, envíenos un correo electrónico a EnzymesForInnovation@neb.com. Para obtener más información, vea el video. P: ¿Es esta enzima sensible a la metilación de CpG de DAM, DCM o mamíferos? R: No. Esta enzima no es sensible a la metilación de CpG de DAM, DCM o mamíferos. Para obtener información actualizada sobre la sensibilidad a la metilación, visite Dam-DCM y Metilación de CpG o REBASE. P: ¿Podrían contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.