Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0694S, I-SceI

I-SceI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10156746. Categorías relacionadas Endonucleasas homing,, Endonucleasas de restricción HM Aplicaciones Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 µg de plásmido de control pGPS2 NotI-linearizado en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Tampón rCutSmart™ 1X Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 10 % Tampón NE™ r2.1: 50 % Tampón NE™ r3.1: 25 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente B Tampón de almacenamiento Tris-HCl 10 mM NaCl 300 mM DTT 1 mM EDTA 0,1 mM Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 7,4 @ 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Preguntas frecuentes P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activo, sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores principales que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en NEBuffer r2.1 y/o r3.1 (nuestros tampones con mayor salinidad), pueden ser inhibidas por la sal en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden dar como resultado soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25 % del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción como corresponda. P: ¿Puede decirme más sobre el cambio de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en NEBuffers? R: En NEB nos complace anunciar la transición de los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart® Buffer) a tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™ Buffer). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan albúmina recombinante. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio. P: En el caso de las enzimas almacenadas a -80 °C, ¿se ve afectada su actividad tras múltiples ciclos de congelación/descongelación? R: Las siguientes enzimas mantuvieron su actividad completa tras 10 ciclos de congelación-descongelación. Si necesita más de 10 ciclos de congelación-descongelación, recomendamos dividir la enzima en alícuotas más pequeñas y congelar cada alícuota a -80 °C. Cac8I EagI-HF I-SceI KasI NlaIII Tenga en cuenta: FseI mantuvo la actividad completa durante solo 5 ciclos de congelación/descongelación.