Laboratorios biológicos de Nueva Inglaterra, R0704L, BccI

BccI se ha reformulado con albúmina recombinante (rAlbúmina) a partir del lote n.º 10251906. Categorías relacionadas Endonucleasas de restricción B Aplicaciones Digestión con enzimas de restricción Unidad de especificación Definición Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para digerir 1 µg de ADN pXba en 1 hora a 37 °C en un volumen de reacción total de 50 μl. Condiciones de reacción Suplemento de tampón rCutSmart™ 1X con DTT 2 mM Incubar a 37 °C Tampón rCutSmart™ 1X Acetato de potasio 50 mM Tris-acetato 20 mM Acetato de magnesio 10 mM Albúmina recombinante 100 µg/ml (pH 7,9 a 25 °C) Actividad en tampones NE Tampón NE™ r1.1: 100 % Tampón NE™ r2.1: 50 % Tampón NE™ r3.1: 10 % Tampón rCutSmart™: 100 % Compatibilidad del diluyente Diluyente A Tampón de almacenamiento Acetato de sodio 50 mM NaCl 500 mM EDTA 0,1 mM TCEP 0,1 mM 200 µg/ml Albúmina recombinante 50 % Glicerol pH 6 a 25 °C Inactivación por calor 65 °C durante 20 minutos Sensibilidad a la metilación Metilación de dam: no sensible Metilación de dcm: no sensible Metilación de CpG: no sensible Preguntas frecuentes P: ¿La actividad de BccI es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG de mamíferos? R: No. BccI no es sensible a la metilación de dam, dcm o CpG. Para obtener información actualizada sobre las sensibilidades de metilación, visite Dam-Dcm y metilación de CpG o REBASE. P: ¿Cuántos pares de bases se deben agregar al final de un cebador de PCR después del sitio de reconocimiento de BccI para garantizar que BccI corte correctamente? R: Se recomienda la adición de 6 pares de bases. P: ¿BccI tiene isoesquizómeros/neoesquizómeros? R: No. Para obtener la información más actualizada sobre isoesquizómeros/neoesquizómeros, consulte REBASE. P: ¿BccI exhibe actividad estrella? R: En condiciones de baja fuerza iónica, alta concentración de enzimas, concentración de glicerol >5%, pH >8.0 o períodos de incubación prolongados, BccI puede presentar actividad estrella. P: Probé su enzima de restricción en el ADN sustrato recomendado por NEB y parece estar activa; sin embargo, no digiere mi ADN. ¿Cuál podría ser la razón? R: La calidad y la limpieza del ADN son factores importantes que pueden afectar la actividad enzimática. Las enzimas de restricción activas en el tampón rCutSmart®, pero no tan activas en el tampón NE r2.1 o r3.1 (nuestros tampones con mayor concentración de sal), pueden verse inhibidas por la sal presente en la reacción. Los procedimientos de purificación de ADN que utilizan columnas de centrifugación pueden generar soluciones de ADN con niveles significativos de sal que pueden transferirse a la reacción e inhibir la actividad enzimática. Para evitar esto, recomendamos que la solución de ADN añadida a la reacción no supere el 25% del volumen total de la reacción. Esto se puede lograr ajustando el volumen total de la reacción según corresponda. P: ¿Podrían contarme más sobre la transición de BSA a albúmina recombinante (rAlbúmina) en los tampones NEB? R: En NEB nos complace anunciar que hemos cambiado los tampones de reacción con BSA (NEBuffer 1.1, 2.1, 3.1 y CutSmart®) por tampones con albúmina recombinante (NEBuffer r1.1, r2.1, r3.1 y rCutSmart™). También estamos en proceso de adaptar todas las formulaciones de enzimas de restricción para que contengan rAlbúmina. Creemos que dejar de usar productos de origen animal es un paso en la dirección correcta y podemos ofrecer esta mejora al mismo precio.