New England Biolabs, T1135S, Kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (100 μg)

Categorías relacionadas PCR y limpieza de ADN,, Aplicaciones de purificación de ácidos nucleicos Especificación de purificación de ácidos nucleicos Materiales necesarios pero no suministrados Isopropanol Etanol Preguntas frecuentes P: ¿Puedo comprar columnas Monarch® y tubos de recolección adicionales para el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin (100 μg) (NEB n.º T1135) por separado? R: Sí, las columnas (NEB n.º T1157) y los tubos de recolección (NEB n.º T2118) para el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin también se venden por separado. P: ¿Puedo usar agua para eluir el ADN cuando utilizo kits Monarch®? R: Sí, se puede usar agua para eluir ADN de las columnas Monarch. Para una máxima eficiencia de elución, asegúrese de que el agua esté libre de nucleasas. Si va a almacenar el ADN a largo plazo, recomendamos usar el tampón Monarch EY (tampón de elución de ADN) suministrado, que contiene 0,1 mM de EDTA. P: ¿Cuál es el volumen mínimo de tampón de elución que se puede utilizar con las columnas Monarch® Spin S3A (NEB n.° T1157)? R: El rango de volumen de elución con las columnas Monarch Spin S3A y el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin (100 μg) es de 50 a 200 μl, siendo 100 μl el volumen de elución recomendado. Si se utiliza el volumen de elución mínimo, se recomienda incubar a temperatura ambiente durante unos minutos más de lo recomendado para maximizar el rendimiento. P: ¿Cuál es la composición de cada tampón incluido en el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (100 μg) (NEB n.° T1135)? R: La composición de los tampones es exclusiva. Sin embargo, podemos compartir lo siguiente: Tampón Monarch BZ: tampón de unión a base de guanidina e isopropanol Tampón Monarch WZ: tampón de lavado a base de etanol Tampón Monarch EY: tampón de elución Tris 10 mM, EDTA 0,1 mM, pH 8,5 P: ¿Cuál es la capacidad de unión máxima de las columnas Monarch® Spin S3A proporcionadas con el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin (100 μg) (NEB n.º T1135)? R: La matriz proporcionada en cada columna puede unir hasta 100 μg de ADN. La purificación de ADN de una PCR u otra reacción enzimática introduce componentes como detergentes, colorantes, proteínas y nucleótidos, todos los cuales pueden competir por la unión a la membrana y afectar la recuperación del ADN. P: ¿Qué factores afectan a la relación (A260/230) cuando se utiliza el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (NEB n.º T1135)? R: La guanidina y el etanol, ambos introducidos durante la preparación, pueden reducir la proporción A260/A230. Seguir el protocolo garantizará la eliminación de estos componentes. Además, aunque es poco probable, pueden eluirse algunas partículas, lo que también puede afectar la proporción. En este caso, un centrifugado adicional de 15 segundos del ADN eluido antes de la evaluación por espectrometría (Nanodrop®) debería ser útil. Retirar la muestra de ADN por la parte superior de la muestra puede ayudar a evitar la transferencia de partículas. P: ¿Tienen alguna recomendación para la purificación de ADN monocatenario (ssDNA) al utilizar el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (NEB n.° T1135)? R: El kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin (100 μg) se puede utilizar para purificar ssDNA. El ssDNA se une con menos fuerza que el dsDNA, y la fuerza de la unión se verá afectada por la longitud, la secuencia y la formación de cualquier estructura secundaria. Para ADN monocatenario < 100 nt, recomendamos utilizar el protocolo de limpieza de oligonucleótidos incluido en el kit, optimizado para recuperar ADN más corto. Si bien el kit Monarch Spin PCR & DNA Cleanup (100 μg) funciona bien con ADN monocatenario, es difícil predecir su eficiencia de recuperación. Por lo tanto, recomendamos realizar una prueba de recuperación con el ADN de interés antes de utilizar la muestra completa. P: ¿Qué tamaño de ADN se puede purificar con el kit Monarch® Spin High-Capacity DNA Cleanup (NEB n.° T1135)? R: Se puede recuperar ADN de 50 pb a 25 kb con el kit Monarch Spin High-Capacity DNA Cleanup (100 µg) (NEB n.° T1135). La eficiencia disminuye con ADN más largo debido a una unión más fuerte a la matriz. La recuperación de ADN ≥ 15 kb se puede mejorar modificando el método de elución, utilizando un tampón de elución calentado (50 °C) y ampliando los tiempos de incubación. Para una recuperación óptima de fragmentos grandes de ADN, siga las instrucciones del manual. Para ADN > 25 kb, ofrecemos un protocolo modificado y optimizado para ADN grande en nuestra página web. Consulte el protocolo disponible en la página web para obtener instrucciones detalladas sobre el procedimiento. P: ¿Son las columnas Monarch® Spin S3A (NEB n.° T1157) compatibles con los colectores de vacío? R: Sí, las columnas Monarch Spin S3A son compatibles con los colectores de vacío. Consulte los protocolos que utilizan colectores de vacío que se incluyen en el manual. Los colectores de vacío se pueden utilizar con otras columnas Monarch, pero pueden requerir optimización o tiempo adicional para que el líquido fluya completamente. P: ¿Puedo utilizar el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (NEB n.° T1135) para purificar oligonucleótidos y otros fragmentos de ADN? R: Sí. Una simple modificación del protocolo, añadiendo etanol a la muestra antes de la unión, aumenta la eficiencia de unión del ADN pequeño a la matriz, lo que permite que los oligonucleótidos y el dsADN corto se unan a la columna. Consulte el Protocolo de Limpieza de Oligonucleótidos. P: ¿Puedo usar el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (NEB n.° T1135) para purificar ADN circular? R: Sí, puede usar el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin (NEB n.° T1135) para purificar ADN circular, tanto monocatenario (ssADN) como bicatenario (dsADN), siguiendo el protocolo estándar de limpieza de ADN. P: ¿Puedo usar el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch® Spin (NEB n.° T1135) para purificar ADN > 25 kb o ADN genómico? R: Sí, puede usar el kit de limpieza de ADN de alta capacidad Monarch Spin (NEB n.° T1135) para purificar ADN de gran tamaño, incluyendo ADN genómico o producto RCA (amplificación por círculo rodante), siguiendo el protocolo modificado proporcionado. Consulte el protocolo correspondiente en nuestra página web para obtener instrucciones detalladas. P: ¿Son compatibles las columnas de centrifugación Monarch® S3A (NEB n.° T1157) con el sistema QIAcube®? R: Las nuevas columnas de centrifugación Monarch y los tubos de recolección están diseñados para garantizar una purificación de ácidos nucleicos de alta calidad. Presentan un bajo volumen de elución, no retienen el tampón y reducen el uso de plástico. Sin embargo, estas nuevas columnas no son compatibles con el sistema QIAcube. P: Veo residuos de sílice en mi columna Monarch. ¿Es un problema? R: No, no es un problema. La presencia de residuos o partículas de sílice en la columna de purificación de ácidos nucleicos no afecta la unión ni la pureza de los ácidos nucleicos. Nuestras columnas están diseñadas para retener fibras de sílice, lo que ayuda a garantizar que no se depositen en el eluido final.