New England Biolabs, T2010S, Monarch® Kit de minipreparación de ARN total

Este producto se discontinuará en abril de 2026 o antes, hasta agotar existencias. Ya está disponible una nueva versión de este producto, con columnas de centrifugación mejoradas. Migrar a las nuevas Categorías relacionadas Extracción y purificación de ARN total, Extracción y purificación de ARN, Purificación de ácidos nucleicos Preguntas frecuentes P: ¿El kit Monarch® Total RNA Miniprep es compatible con los reactivos Luna® RT-qPCR? R: Sí. El ARN purificado con estos kits se puede usar para RT-qPCR con todos los kits Luna One-Step RT-qPCR de NEB y los productos LunaScript® RT. La RT-qPCR de ARN purificado con Monarch de varios tipos de muestras produce constantemente resultados de alta calidad, lo que permite una cuantificación precisa y reproducible Para demostrar la calidad y la utilidad del ARN total Monarch para la cuantificación basada en RT-qPCR, se realizaron y visualizaron 16 experimentos utilizando el enfoque de "puntos en casillas" desarrollado en NEB. Cada experimento comprende reacciones por triplicado para un rango de cinco logaritmos de concentraciones de la plantilla de entrada y controles sin plantilla (NTC) (18 reacciones en total). Un experimento de RT-qPCR de alta calidad, representado por un punto dentro del recuadro, se define como aquel con una eficiencia de entre el 90 % y el 110 %, un ΔCq ≥3 (donde ΔCq es la diferencia entre el Cq promedio de la NTC y la entrada más baja) y un nivel de calidad ≥4 (basado en la linealidad, la reproducibilidad, la forma de la curva y otros parámetros). Se utilizaron cebadores dirigidos a las variantes de GAPDH (rata, ratón, tomate, levadura), variantes de PGK (rata) y variantes de B-actina (rata, ratón, tomate) con ARN total purificado de cerebro de rata, hígado de rata, riñón de rata, riñón de ratón, hoja de tomate y levadura como plantillas. Los ensayos de RT-qPCR se ensamblaron según las instrucciones utilizando reactivos Luna RT-qPCR y se cicló en un Bio-Rad CFX384. La RT-qPCR con ARN purificado con Monarch genera curvas de qPCR de alta calidad que demuestran una cuantificación precisa en una amplia variedad de tipos de muestras. El ARN purificado con Monarch de sangre humana, riñón de rata, hoja de tomate y levadura S. cerevisiae se diluyó para producir un rango de cinco logaritmos de concentraciones de plantilla de entrada. Se utilizaron cebadores dirigidos a las variantes de GAPDH (tomate, levadura), PGK (rata) o SMG1 (sangre humana) para los ensayos de RT-qPCR, ensamblados según las instrucciones con reactivos Luna RT-qPCR (NEB n.° E3005) y ciclados en un Bio-Rad CFX384. P: ¿Es compatible el kit Monarch® Total RNA Miniprep con los reactivos NEBNext® para la preparación de bibliotecas de ARN? R: Sí. El ARN purificado con este kit puede usarse para la preparación de bibliotecas de ARN con los reactivos NEBNext RNA Library Prep de NEB. El ARN purificado con Monarch puede utilizarse para preparar bibliotecas de ARN-seq de alta calidad para el análisis de la expresión génica. Los niveles de transcripción en el ARN de referencia humano universal (UHRR, Agilent) se comparan antes y después de la repurificación con Qiagen RNeasy® o el kit Monarch Total RNA Miniprep. Se observa una fuerte correlación con el UHRR sin tratar con ambos métodos (R de Pearson > 0,99 para ambas muestras). Todas las muestras presentan una cobertura constante de transcripción de extremo a extremo, lo que indica la ausencia de degradación detectable durante la purificación. El ARN poli-A seleccionado se seleccionó a partir de 100 ng de muestras sin tratar de Qiagen y Monarch utilizando el módulo de aislamiento magnético de ARNm NEBNext Poly(A) (NEB n.° E7490). Las bibliotecas de ARN-seq se prepararon posteriormente con el kit de preparación de biblioteca de ARN direccional NEBNext Ultra II para Illumina® (NEB n.° E7760) antes de la secuenciación en un instrumento Miseq® (2 x 150). Se tomaron muestras aleatorias de 1,6 millones de lecturas de cada biblioteca y se recortó el adaptador (Seqprep v1.1). Los niveles de todos los transcritos de Gencode v26 se evaluaron con Salmon (0,4) y se graficaron arriba (panel A). La cobertura promedio 5'-3' de los transcritos de Gencode v26 (evaluada con CollectRnaSeqMetrics 1.56 de Picard tras mapear al genoma de referencia GRCh38 con Hisat v2.0.3 y marcar duplicados con MarkDuplicates 1.56 de Picard) se muestra a continuación (panel B). P: ¿Cuál es el volumen mínimo en el que puedo eluir mi ARN con el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010)? R: Para una recuperación máxima, recomendamos eluir el ARN con 50-100 µl de agua sin nucleasas para humedecer completamente la membrana. Sin embargo, la elución en 30 µl proporciona una recuperación superior al 80 %. También puede eluir con un volumen menor para una muestra de ARN más concentrada, pero la recuperación disminuirá. Si usa menos de 50 µl para la elución, es importante pipetear el agua libre de nucleasas directamente al centro de la membrana durante la elución. Porcentaje de recuperación como función del volumen de elución para el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB #T2010) El ARN total (2 µg, estándar ribosomal 16S y 23S de E. coli, Sigma) se cargó en una columna de purificación de ARN Monarch (NEB #T2007) siguiendo el protocolo de limpieza de reacción con tratamiento opcional con DNasa I para el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB #T2010). Las eluciones usando los volúmenes listados se realizaron en preparaciones por triplicado y el porcentaje de recuperación se calculó usando los valores de concentración medidos en un espectrofotómetro Nanondrop y la conversión a un porcentaje de la cantidad de entrada. P: ¿Se puede usar el kit Monarch® Total RNA Miniprep para purificar ARN de levadura? R: Sí. El kit se puede usar para aislar ARN de levadura. Se recomienda la lisis mecánica y la homogeneización para estas muestras difíciles de lisar. Las instrucciones se pueden encontrar en el manual del producto o en el protocolo en línea. P: ¿Se puede usar el kit Monarch® Total RNA Miniprep para purificar ARN de bacterias? R: Sí. El kit se puede usar para aislar ARN de bacterias. Se recomienda la lisis mecánica y la homogeneización para estas muestras difíciles de lisar. Las instrucciones se pueden encontrar en el manual del producto o en el protocolo en línea. P: ¿Se puede usar el kit Monarch® Total RNA Miniprep para purificar ARN de plantas? R: Sí. El kit se puede usar para aislar ARN de tejidos vegetales. Se recomienda la lisis mecánica y la homogeneización para estas muestras difíciles de lisar. Las instrucciones se pueden encontrar en el manual del producto o en el protocolo en línea. P: ¿Cómo puedo conservar mi muestra si no estoy listo para extraer ARN inmediatamente después de la cosecha? R: La conservación de las muestras es un paso importante para mantener la integridad del ARN. Las muestras se pueden conservar utilizando el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch® (NEB n.° T2011). Las instrucciones de uso se pueden encontrar en el manual o en línea en las Directrices para la estabilización y el almacenamiento de muestras utilizando el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch. P: ¿Puedo comprar los tampones y las columnas Monarch® por separado? R: Las columnas de centrifugación Monarch y varios tampones y reactivos Monarch también se ofrecen por separado. P: Observo ADN genómico en mis preparaciones al utilizar el kit Monarch Total RNA Miniprep. ¿Cuál podría ser el problema? R: La contaminación del ADN genómico es muy común en las preparaciones de ARN. Los kits comerciales típicos son eficaces para reducir la carga de ADN genómico. El kit Monarch Total RNA Miniprep utiliza una columna específica para capturar el ADN genómico (NEB n.° T2017) y un tratamiento enzimático independiente con DNasa I en la columna. Estas actividades combinadas reducen los niveles de ADN en más de 6 órdenes de magnitud. Eliminar los restos de ADN puede ser problemático. Para las aplicaciones en las que sea necesario, sugerimos un tratamiento independiente con DNasa I fuera de columna, seguido de una limpieza. El protocolo está disponible en línea y en el manual del producto. P: ¿Puedo usar el kit Monarch® Total RNA Miniprep para la limpieza de ARN después de manipulaciones enzimáticas? R: Sí, este kit puede usarse para limpiar ARN después de manipulaciones enzimáticas, incluyendo el marcaje y el tratamiento con DNasa I. Las instrucciones se encuentran en el manual del producto o en el protocolo en línea. P: ¿Puedo omitir el paso del tratamiento con DNasa I en columna del protocolo del kit Monarch® Total RNA Miniprep? R: Aunque el tratamiento con DNasa I en columna es opcional, recomendamos incluirlo. Si su aplicación no es sensible a la contaminación del ADN y dispone de poco tiempo, puede omitirlo; sin embargo, es probable que observe contaminación de ADNg. P: ¿Puedo omitir el paso de eliminación de ADNg en columna del protocolo del kit Monarch® Total RNA Miniprep? R: No recomendamos omitir el paso de la columna de eliminación de ADNg. Junto con el tratamiento con DNasa I, la columna de eliminación de ADNg garantiza la eliminación eficiente del ADN genómico. Tenga en cuenta que este paso no se realiza al trabajar con muestras de sangre completa. P: ¿Puedo utilizar las proteinasas K y DNasa I sobrantes del kit Monarch® Total RNA Miniprep para otras aplicaciones? R: Sí, pero las formulaciones se han optimizado para su uso con el kit Monarch Total RNA Miniprep y no se han probado en otras aplicaciones. P: ¿Se puede utilizar el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010) para purificar ARN de la saliva? R: Sí. Recomendamos estabilizar las muestras de saliva en el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch (NEB n.° T2011) y procesarlas como se describe aquí. Es importante tener en cuenta que el ARN purificado de la saliva suele degradarse con valores de RIN entre 2,0 y 3,0. P: ¿Se puede usar el kit Monarch Total RNA Miniprep NEB T2010 para purificar ARN de hisopos bucales (mejillas)? R: Sí. Recomendamos recolectar los hisopos bucales con el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch (NEB n.° T2011) y procesar las muestras como se describe en este protocolo. P: ¿Se puede usar el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010) para purificar ARN de plasma o suero? R: Sí. Recomendamos estabilizar de 200 µl a 1 ml de plasma o suero mezclándolo con un volumen igual de reactivo de protección de ADN/ARN Monarch 2X (NEB n.° T2011) y siguiendo el protocolo para sangre completa de mamíferos. Es importante tener en cuenta que la producción de ARN en plasma y suero suele ser baja, de entre 1 y 100 ng/ml. El ARN purificado se puede concentrar rápida y fácilmente con el kit de limpieza de ARN Monarch (10 µg) (NEB n.º T2030). P: ¿Se puede utilizar el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.º T2010) para purificar ARN de sangre nucleada (p. ej., de aves, peces o reptiles)? R: Sí. Recomendamos estabilizar la sangre nucleada con el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch (NEB n.º T2011) y procesar las muestras como se describe a continuación. Purificación de ARN de sangre nucleada: Añada 200 µl de reactivo de protección de ADN/ARN 1X a 10 µl de sangre nucleada. Mezcle pipeteando. Añada 160 µl de tampón de reacción de proteinasa K y 4 µl de proteinasa K Monarch. Mezcle bien. Incube a 55 °C durante 30 min (Nota: Los tiempos de incubación óptimos pueden variar). Añada un volumen igual de isopropanol y mezcle con vórtex. Transfiera la muestra a una columna de eliminación de gDNA equipada con un tubo de recolección y centrifugue durante 30 segundos; deseche el fluido. Transfiera la columna a un nuevo tubo de recolección. Añada 200 µl de tampón de lisis de ARN Monarch a la matriz y deje reposar durante 5 min. Centrifugue durante 30 segundos. GUARDE EL FLUJO y deseche la columna de eliminación de gDNA. Añada un volumen igual de etanol al fluido y mezcle bien pipeteando. Continúe con el paso 4 de la parte 2: Unión y elución de ARN en el manual del producto (Carga de la muestra en la columna de purificación de ARN). P: ¿Se puede utilizar el kit Monarch Total RNA Miniprep para purificar ARN de drosophila? R: Sí. Para insectos, recomendamos la lisis mecánica y la homogeneización en tampón de lisis de ARN Monarch (NEB n.º T2012), seguida de la unión y elución de ARN como se describe a continuación. Purificación de ARN de Drosophila: Transfiera la drosophila (hasta 10 mg) a un tubo con microesferas para homogeneización y añada 800 µl de tampón de lisis de ARN Monarch. Disuelva la muestra mecánicamente con un homogeneizador de microesferas. Transfiera el lisado/homogenizado a un tubo de microcentrífuga sin ARNasa. Centrifugue durante 2 min (16 000 xg) para sedimentar los restos. Transfiera el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga sin ARNasa. Continúe con el Paso 1 de la Parte 2: Unión y elución del ARN, del Manual del producto. P: ¿Se puede utilizar el kit Monarch Total RNA Miniprep para purificar ARN de embriones/larvas de pez cebra? R: Sí. Recomendamos estabilizar los embriones o larvas en el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch (NEB n.º T2011), seguido de la lisis/homogeneización mecánica y el procesamiento como se describe a continuación. Purificación de ARN de embriones y larvas de pez cebra: Añada hasta 20 embriones o larvas a 300 µl de reactivo de protección de ADN/ARN Monarch 1X, agite brevemente en vórtex y transfiera la muestra a un tubo con microesferas para homogeneización. Disgrege la muestra mecánicamente con un homogeneizador de microesferas. Transfiera el lisado a un tubo de microcentrífuga sin ARNasa. Añada 30 µl de tampón de reacción de proteinasa K y 15 µl de proteinasa K Monarch, mezcle brevemente e incube a 55 °C durante 5 min. Agite brevemente en vórtex y centrifugue durante 2 min (16 000 xg) para sedimentar los restos. Transfiera el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga sin ARNasa. Añada un volumen igual de tampón de lisis de ARN Monarch y agite brevemente en vórtex. Continúe con el paso 1 de la parte 2: Unión y elución del ARN en el manual del producto. P: ¿Se puede eluir el ADN genómico capturado en la columna de eliminación de ADNg Monarch (NEB n.° T2017) y utilizarlo en aplicaciones posteriores? R: Sí. Aunque el kit no se desarrolló para esta aplicación, el ADN genómico se puede eluir de la columna de eliminación de ADNg para su uso en otros flujos de trabajo. Recuerde lavar la columna de eliminación de ADNg con tampón de cebado de ARN, seguido de tampón de lavado de ARN (x2), antes de la elución con agua sin nucleasas o tampón TE. NEB no ha caracterizado ni optimizado esta modificación del protocolo, por lo que no disponemos de datos sobre la eficiencia de unión ni la pureza del ADN obtenido. P: ¿Puedo lisar mis células adherentes directamente en sus pocillos al utilizar el kit Monarch Total RNA Miniprep? R: Sí. Nuestro protocolo estándar para células de mamíferos cultivadas se puede modificar para lisar las células directamente en los pocillos de una placa multipocillo. Para procesamiento inmediato: Retire el medio del pocillo y enjuague con PBS. Agregue el tampón de lisis de ARN Monarch (NEB n.° T2012) directamente al pocillo según la tabla a continuación: Tamaño de la placa multipocillo Volumen del tampón de lisis de ARN Monarch 6 pocillos > 600 μl 12 pocillos 300 - 600 μl 24 pocillos 300 μl 48 pocillos 300 μl Mezcle bien y continúe con el paso 1 de la parte 2: Unión y elución del ARN. Para el almacenamiento: Retire el medio de los pocillos y enjuague con PBS. Agregue 1X Monarch DNA/RNA Protection Reagent (NEB #T2011) (asegúrese de diluir el concentrado 2X) directamente al pocillo de acuerdo con la tabla a continuación: Tamaño de placa multipocillo Volumen de 1X Monarch DNA/RNA Protection Reagent 6 pocillos >600 μl 12 pocillos 300 - 600 μl 24 pocillos 300 μl 48 pocillos 300 μl Mezcle bien y almacene las muestras hasta que estén listas para su procesamiento. Las muestras se pueden congelar para un almacenamiento a largo plazo o se pueden refrigerar o mantener a temperatura ambiente para un almacenamiento a medio o corto plazo (consulte las Instrucciones de estabilización y almacenamiento de muestras o consulte el manual del producto para obtener más detalles). Cuando esté listo para procesar, agregue un volumen igual de Monarch RNA Lysis Buffer (NEB #T2012) y continúe con el Paso 1 de la Parte 2: Unión y elución del ARN. P: Me gustaría comprar el contenido del kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010S) por separado. ¿Qué productos necesito? R: Al igual que con todos los kits de purificación de ácidos nucleicos Monarch, las columnas y los componentes del kit T2010 se venden por separado. El contenido del kit se describe a continuación, pero tenga en cuenta que algunos tipos de muestra no requieren todos los componentes. A continuación, se ofrece un resumen de los productos necesarios para procesar los tipos de muestra más comunes, y el manual del producto proporciona información detallada sobre el procesamiento de diversos tipos de muestra. Productos necesarios para procesar varios tipos de muestras Nombre del producto NEB # Células de mamíferos cultivadas ** Tejido sanguíneo o leucocitos Hisopos de saliva+ en medios de transporte Hisopos sin medios de transporte Muestras difíciles de lisar Reactivo de protección de ADN/ARN Monarch®* T2011 ✓ (2X) ✓ (1X) ✓ (2X) ✓ (1X) ✓*** Tampón de lisis de ARN Monarch® T2012 ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ Columnas de eliminación de ADNg Monarch T2017 ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ ✓ Tampones asociados con proteinasa K + Componentes de T2019 – Monarch Paquete de enzimas de ARN total ✓ ✓ ✓ ✓ Tampón asociado con DNasa I + Componentes de T2019 – Monarch Paquete de enzimas de ARN total Opcional pero recomendado para todos los tipos de muestra Columnas de purificación de ARN Monarch® T2007 Requerida para todos los tipos de muestra Tampón de cebado de ARN Monarch® T2013 Requerido para todos los tipos de muestra Tampón de lavado de ARN Monarch® T2014 Requerido para todos los tipos de muestra Agua libre de nucleasas B1500 Requerida para todos los tipos de muestra * El reactivo de protección se suministra como un concentrado 2X. Para muestras líquidas (p. ej., sangre), utilice el concentrado 2X; para otras muestras, prepare una dilución 1X. ** El reactivo de protección no es necesario para procesar células de mamíferos cultivadas. Sin embargo, las células se pueden estabilizar y almacenar en reactivo de protección, si se desea, y luego procesar. *** El reactivo de protección es necesario para la lisis mecánica de muestras difíciles de lisis. Para la lisis enzimática de bacterias y levaduras, no se requiere reactivo de protección + Para los usuarios interesados ​​en utilizar el protocolo de proteinasa K para muestras de saliva, también se requieren el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch y la proteinasa K. P: ¿Se puede automatizar la extracción de ARN con los kits Monarch? R: Sí. NEB ha automatizado con éxito la extracción de ARN total (incluido el ARN viral) de muestras de saliva en las plataformas de automatización KingFisher™ Flex utilizando los flujos de trabajo del kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010) y del kit Monarch RNA Cleanup (NEB n.° T2040), con algunas modificaciones en el protocolo. Al automatizar la extracción en la plataforma KingFisher Flex, no se utilizan columnas de centrifugación; en su lugar, se requieren microesferas magnéticas (p. ej., Dynabeads® MyOne™ Silane). Para la extracción de ARN viral, al utilizar el flujo de trabajo del kit Monarch RNA Cleanup, se requiere un paso adicional con el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch (NEB n.° T2011), que se vende por separado. Nuestros protocolos detallados contienen más información: Automatización de la extracción de ARN de la saliva utilizando el kit Monarch Total RNA Miniprep Automatización de la extracción de ARN de la saliva utilizando el kit Monarch RNA Cleanup P: ¿Se inactiva el virus SARS-CoV-2 vivo durante la extracción con el kit Monarch Total RNA Miniprep? R: Aunque NEB no ha validado internamente la inactivación viral utilizando el kit Monarch Total RNA Miniprep, los usuarios de nuestros productos han confirmado que tanto el tampón de lisis de ARN Monarch (NEB n.º T2012) como el reactivo de protección de ADN/ARN Monarch (NEB n.º T2011) son eficaces para inactivar el virus SARS-CoV-2 vivo en determinadas condiciones. Los kits Monarch se venden solo para uso en investigación (RUO) y los usuarios siempre deben adherirse a las pautas de seguridad de su institución. P: Noté que en el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.º T2010), las columnas de eliminación de ADNg Monarch (NEB n.º T2017) ahora están teñidas de naranja. ¿Afecta esto al rendimiento? R: Las columnas de eliminación de ADNg Monarch ahora están teñidas de naranja para distinguirlas de las demás columnas del kit. Este color no afecta al rendimiento. Siga las instrucciones de uso recomendadas, incluidas las instrucciones sobre la cantidad máxima de entrada del manual. Guarde las columnas teñidas protegidas de la luz para evitar que el color se desvanezca con el tiempo. Puede haber variaciones naturales en el color de las columnas. P: Noto que estoy aplicando fuerza para encajar la columna en un tubo de recolección. ¿Debería hacerlo? ¿Qué tubos de recolección son compatibles con las columnas? R: Todos los kits Monarch® incluyen tubos de recolección compatibles para las columnas de centrifugación. Si utiliza tubos de recolección fuera de un kit determinado, utilice los tubos de recolección de centrifugación Monarch® (NEB n.° T2118). No fuerce ninguna columna en tubos de recolección no recomendados que tengan un ajuste muy ajustado para evitar dañar la columna. P: ¿Son compatibles las columnas de eliminación de gDNA Monarch (NEB n.° T2017) y las columnas de purificación de ARN Monarch (NEB n.° T2007) incluidas en el kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010) con el sistema QIACube®? R: No, estas columnas no son compatibles con el sistema QIACube. No fuerce la introducción de las columnas en el sistema QIACube para evitar dañar el sistema o las columnas. P: ¿Se pueden intercambiar los componentes del antiguo kit Monarch Total RNA Miniprep (NEB n.° T2010) con los de la nueva versión del kit (Monarch Spin RNA Isolation Kit (Mini), NEB n.° T2110)? R: Sí, aunque la nueva versión del kit Monarch Spin RNA Isolation Kit (Mini) incorpora mejoras tanto en la columna física como en la composición química del tampón, los componentes de la versión anterior son compatibles con el kit actualizado. Si necesita ayuda específica sobre los componentes, póngase en contacto con el soporte técnico de NEB. P: ¿Son compatibles las muestras almacenadas en el reactivo de protección de ADN/ARN con la nueva versión del kit (Monarch Spin RNA Isolation Kit (Mini), NEB n.° T2110)? R: Sí, las muestras conservadas en el reactivo de protección de ADN/ARN pueden procesarse con el Monarch Spin RNA Isolation Kit (Mini). Recomendamos proceder con la homogeneización mecánica o la aplicación de proteinasa K en el reactivo de protección de ADN/ARN, según lo recomendado en el protocolo del Monarch® Total RNA Miniprep Kit (NEB n.° T2010), y sustituir la adición del tampón de lisis de ARN por el tampón de ADN/ARN Monarch StabiLyse para continuar con el protocolo del nuevo kit. P: He observado que el paquete de enzimas T2019L (Monarch Total RNA Miniprep Enzyme Pack) ha sido descontinuado. ¿Qué enzimas puedo usar en lugar del paquete T2019L? R: La proteinasa K de grado molecular (P8107) se puede usar con T2110 como sustituto directo de la proteinasa K Monarch (T2001). El tampón de reacción de proteinasa K (T2003) no es necesario con P8107, por lo que se puede proceder sin él. NEB ofrece Monarch® DNasa I liofilizada (T2104) para el tratamiento con DNasa I tanto en columna como en tubo. P: ¿Cómo puedo evaluar la integridad y pureza del ARN? R: La pureza de las muestras de ARN eluidas se puede evaluar rápidamente revisando las relaciones de DO obtenidas durante la espectrofotometría de rutina. El ARN puro suele tener una A260/280 de 1,9-2,1 y una A260/230 de 2,0-2,2. Muchos factores pueden influir en estos valores, como el uso de una solución de referencia en blanco adecuada, el pH del tampón y contaminantes como proteínas, sales del tampón, etanol, etc. Para obtener más información sobre este tema, consulte Evaluación de ARN. P: ¿Puedo usar la proteinasa K de NEB, grado de biología molecular (NEB n.º P8107S) junto con el kit Monarch® Total RNA Miniprep? R: No recomendamos usar la proteinasa K de NEB junto con este kit. Las enzimas incluidas en el kit están optimizadas para su uso en esta aplicación. La proteinasa K de Monarch está disponible para su compra como un componente del paquete de enzimas de ARN total de Monarch (NEB n.º T2019). P: ¿Puedo usar la DNasa I de NEB (n.º M0303) con el kit Monarch Total RNA Miniprep? R: No recomendamos usar la DNasa I de NEB junto con este kit. Las enzimas incluidas en el kit están optimizadas para su uso en esta aplicación. Monarch DNase I está disponible para su compra como un componente del paquete de enzimas de ARN total Monarch (NEB n.° T2019).