Kit de extracción de ADNg Monarch® Spin, T3010S, de New England Biolabs

A partir del 20 de noviembre de 2025, se actualizaron los protocolos para eliminar el paso de centrifugado a baja velocidad (1000 × g), lo que agiliza el flujo de trabajo y ahorra tiempo. Nuestras pruebas no han demostrado ningún impacto en el rendimiento ni en la producción. Kits que utilizan columnas Monarch Spin S2C teñidas de naranja ( Categorías relacionadas Extracción y purificación de ADN genómico, Aplicaciones de purificación de ácidos nucleicos Preguntas frecuentes sobre purificación de ácidos nucleicos P: ¿Cuál es la composición de cada tampón proporcionado con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin? R: Las composiciones de los tampones son exclusivas. Sin embargo, podemos compartir la siguiente información: Tampón de lisis tisular de ADNg Monarch®..................Tampón de lisis a base de detergente Tampón de lisis celular de ADNg Monarch®........................Tampón de lisis a base de clorhidrato de guanidinio Tampón de lisis sanguínea de ADNg Monarch®..................Tampón de lisis a base de clorhidrato de guanidinio Tampón de unión de ADNg Monarch®..................Tampón a base de tiocianato de guanidinio Tampón de lavado de ADNg Monarch®..................................Tampón de lavado a base de etanol Tampón de elución de ADNg Monarch®............................10 mM Tris-HCl, pH 9,0, 0,1 mM EDTA P: ¿Cuál es la capacidad máxima de unión de las columnas del kit de extracción de ADNg Monarch® Spin? R: La matriz de la columna unirá entre 25 y 30 µg de ADN genómico (ADNg), aunque en algunos casos se han observado mayores rendimientos. Es importante tener en cuenta que la capacidad de unión de la matriz se reducirá si hay cantidades significativas de proteínas o polisacáridos insolubles en el lisado. Consulte nuestras directrices para elegir las cantidades de entrada y evitar sobrecargar las columnas. Además, si el ADNg tiene más de 80 kb, no se puede eluir eficazmente de la matriz. P: ¿Cuál es el volumen mínimo de elución que se puede utilizar con las columnas del kit de extracción de ADNg Monarch® Spin? R: El volumen mínimo de elución es de 35 µl. Para una recuperación máxima, se recomiendan 100 µl. Volúmenes de elución menores darán lugar a muestras más concentradas, pero también a un menor rendimiento. Normalmente, cuando se utilizan 35 µl para la elución, los rendimientos son de aproximadamente Un 20 % menor que al usar 100 µl. El uso de volúmenes de elución inferiores a 35 µl dará como resultado una humectación inconsistente de la matriz de sílice y una recuperación significativamente reducida. Recuperación de ADN genómico utilizando varios volúmenes de elución en el kit de extracción de ADNg Monarch Spin. El rango óptimo de volumen de elución para la elución es de 35 a 100 µl. Se preparó un pool de lisado utilizando 10 mg de muestras de hígado de rata estabilizadas con RNAlater® y siguiendo el protocolo de tejido Monarch. Los volúmenes de elución utilizados en muestras por triplicado fueron 25, 30, 35, 40, 50, 75 y 100 µl. El rendimiento promedio obtenido con un volumen de elución de 100 µl fue de 19,1 µg, que se consideró un rendimiento del 100 %. Utilizando 35 µl para eluir, el rendimiento promedio fue del 81,6 %; 25 µl y 20 µl arrojaron un rendimiento del 74 % y del 70,6 %, respectivamente. Para volúmenes ≥35 µl, el volumen recuperado tras la elución fue ~5 µl inferior al volumen de elución añadido, y para volúmenes <30 µl, el volumen recuperado fue ~10 µl inferior. Las pruebas realizadas con otros materiales de partida mostraron resultados similares, con una reducción del 20-25 % en el rendimiento general cuando los volúmenes de elución se redujeron de 100 a 35 µl. Para obtener más información, consulte la sección "Consideraciones sobre la elución y el almacenamiento" en el manual del producto. P: ¿Qué importancia tiene precalentar el tampón de elución a 60 °C? ¿Sería suficiente una temperatura de 56 °C? R: El precalentamiento del tampón de elución es esencial para obtener la máxima recuperación con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin. Si resulta más conveniente, se puede utilizar una temperatura de 56 °C, pero puede resultar en una ligera reducción del rendimiento. El tampón de elución a temperatura ambiente puede También se puede utilizar, pero esto resultará en una reducción del 20-30% en el rendimiento y podría requerir una segunda elución. Además, a temperatura ambiente, los fragmentos grandes de ADNg eluyen con menor eficiencia, por lo que el ADNg eluido tendrá un tamaño promedio menor. Para más información, consulte "Consideraciones para la elución y el almacenamiento" en el manual del producto. P: ¿Puedo obtener una mejor recuperación con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin si realizo una segunda elución con el eluyente de la primera elución? R: El protocolo Monarch para la purificación de ADNg se ha optimizado para máxima velocidad y comodidad. El paso de elución con tampón de elución precalentado permite una recuperación máxima en un solo paso de elución. Sin embargo, se puede realizar un segundo paso de elución para maximizar la recuperación. Esta segunda elución se puede realizar utilizando una alícuota nueva de tampón de elución de ADNg Monarch o el eluyente de la primera elución, para minimizar la dilución del ADN. Se puede lograr un aumento del 10% en el rendimiento total. Para más información, Consulte “Consideraciones para la elución y el almacenamiento” en el manual del producto. P: ¿Puedo usar un tampón de elución diferente al suministrado con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin (NEB n.° T3010)? R: El tampón de elución suministrado con el kit es Tris-HCl 10 mM, pH 9,0, EDTA 0,1 mM. Este tampón es óptimo para el almacenamiento a largo plazo de ADNg. Se puede usar cualquier tampón bajo en sal para la elución, como Tris-HCl 10 mM, pH 8,5, tampón TE o agua sin nucleasas. Precalentar el tampón de elución a 60 °C garantiza una elución rápida y eficiente del ADNg. Para obtener más información, consulte “Consideraciones para la elución y el almacenamiento” en el manual del producto. P: ¿Qué tamaño de ADNg se puede purificar con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin? R: Suponiendo que se haya utilizado material de partida de alta calidad, el tamaño del pico del ADNg aislado con este kit... El tamaño de la muestra varía entre 50 y 60 kb. Los números de integridad del ADN (DIN) típicos para el ADNg aislado de sangre, células o tejidos rondan los 9,0. El protocolo de purificación de ADNg Monarch está optimizado para el aislamiento de ADNg de mayor tamaño que el aislado con otros kits comerciales. Por ejemplo, incluye la elución con un tampón precalentado que mejora la elución de fragmentos de ADN más grandes. Sin embargo, algunos materiales de partida, como los hisopos bucales o la saliva, contienen una proporción significativa de células muertas. En estas células, los mecanismos apoptóticos han activado nucleasas que digieren el ADNg en fragmentos más cortos. El tamaño máximo del ADNg aislado de estas muestras suele estar entre 20 y 40 kb. P: ¿Cuál es la cantidad mínima de entrada que se puede utilizar con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin? R: Las cantidades de material de entrada que dan como resultado rendimientos esperados de alrededor de 100 ng de ADNg corresponden a: 5 µl de sangre completa, 1 x 10⁻¹ células cultivadas o 0,2 mg de tejido. Si se utiliza una cantidad menor de material de entrada, la unión no específica a las superficies provocará una disminución de la tasa de recuperación. Para obtener los mejores resultados con cantidades muy pequeñas de material de entrada, se recomienda el uso de ARN transportador. Consulte el manual del producto para obtener más detalles. P: ¿Puedo usar el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin para limpiar ADNg extraído con fenol/cloroformo? R: Sí, el kit de extracción de ADNg Monarch Spin puede usarse para limpiar ADNg purificado con fenol/cloroformo siguiendo el protocolo de limpieza de ADN genómico. Sin embargo, la recuperación puede ser inferior al 80 % habitual, ya que el ADN purificado con fenol/cloroformo suele producir fragmentos más largos. Aunque el uso de tampón de elución precalentado en el protocolo Monarch facilita la elución de fragmentos grandes de ADNg, la fracción de ADNg de más de 80 kb se eluirá de forma menos eficiente de la matriz de sílice. P: ¿Puedo usar el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin para la limpieza de ADNg? R: Sí, el El kit de purificación de ADN genómico Monarch se puede utilizar para limpiar ADNg de reacciones enzimáticas o protocolos de purificación previos siguiendo el protocolo de limpieza de ADN genómico. La limpieza se puede realizar directamente sobre el ADNg o con un paso previo de inactivación enzimática con proteinasa K. Se puede esperar una recuperación de aproximadamente el 80 % del ADNg con un solo paso de elución cuando la cantidad de entrada es >100 ng. Sin embargo, si el ADN de entrada tiene más de 80 kb de longitud, como puede ser el caso del ADNg purificado siguiendo, por ejemplo, protocolos de fenol-cloroformo o de salinización, la eficiencia de elución puede ser menor porque el ADNg >80 kb no se eluye eficientemente de la matriz de sílice. P: ¿Cómo puedo evaluar la integridad y pureza del ADNg? R: La pureza de las muestras de ADNg eluidas se evalúa revisando las relaciones de DO obtenidas durante la espectrofotometría de rutina. El ADNg puro suele tener una A260/280 de 1,8-1,9 y una A260/230 de 1,8–2,5. La integridad del ADNg se evalúa cargando aproximadamente 100 ng por muestra en un gel de agarosa al 0,75 % y comparando la distribución de tamaño con un marcador adecuado, como el ADN lambda, ya sea como ADN completo (NEB n.° N3011) o digerido con HindIII (NEB n.° N3012). Normalmente, en el caso del ADNg intacto, la mayor parte de la señal del ADNg será mayor que la banda superior de la digestión con HindIII. Como alternativa, las muestras de ADNg pueden analizarse en una Agilent TapeStation® utilizando una cinta Genomic DNA ScreenTape. Este sistema proporciona información sobre el tamaño de pico del ADNg y la integridad general mediante el DIN (Número de Integridad del ADN). Un tamaño de pico alto (>50 kb) y un DIN >8,5 indican que el ADN es de alta calidad. Para obtener más información sobre la evaluación de la pureza de los ácidos nucleicos, descargue nuestra nota de aplicación: Guía práctica para el análisis de la concentración y pureza de ácidos nucleicos con microvolumen. Espectrofotómetros. P: ¿Puedo usar una ARNasa A diferente con el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin? R: Siempre que la ARNasa A tenga una concentración y especificaciones de actividad similares, debería ser adecuada. Sin embargo, muchos productos de ARNasa A no tienen las mismas especificaciones de calidad que la ARNasa A Monarch, que no presenta actividad detectable de endonucleasa, exonucleasa, ADNasa ni proteasa, y está libre de ADN. Estas especificaciones pueden ser relevantes para sus aplicaciones posteriores. P: ¿Puedo usar una proteinasa K diferente con el kit de purificación de ADN genómico Monarch®? R: Siempre que la proteinasa K tenga una concentración y especificaciones de actividad similares, debería ser adecuada. La proteinasa K, grado de biología molecular (NEB n.° P8107), está disponible para su compra por separado y puede utilizarse como sustituto directo de la (NEB n.° P8200) en todos los protocolos Monarch sin ninguna modificación. Sin embargo, muchos otros productos de proteinasa K no tienen las mismas especificaciones que los productos de proteinasa K de NEB (NEB #P8200 o #P8107), que ha sido altamente caracterizada para un rendimiento más consistente. Además, la proteinasa K de NEB no presenta actividad detectable de endonucleasa, exonucleasa ni DNasa, y está libre de ADN. Estas especificaciones pueden ser relevantes para sus aplicaciones posteriores. P: ¿Puedo omitir el paso de centrifugación de unión a baja velocidad para ahorrar tiempo? R: Puede omitir este paso si lo desea y aun así obtendrá buenos resultados. Sin embargo, los resultados serán inconsistentes y, dependiendo del material de partida, los rendimientos pueden reducirse entre un 5 y un 30 %. La unión a baja velocidad es particularmente importante para una recuperación óptima al procesar muestras de tejido que contienen altas cantidades de ADN y al realizar el Protocolo de Limpieza de ADN Genómico. P: ¿Puedo omitir el paso de digestión con ARNasa A del protocolo? R: Sí, el procedimiento de purificación de ADN genómico de Monarch ha sido diseñado para minimizar la cantidad de ARN que se copurifica. Los porcentajes típicos de ARN que se encuentran en los eluidos de ADN genómico de Monarch cuando se omite el paso de digestión con ARNasa A son del 1 % (Sangre) Protocolo), 10 % (Protocolo Celular) y 1-5 % (Protocolo Tisular). Estas bajas cantidades no suelen afectar a la mayoría de las aplicaciones posteriores. Si se incluye el paso de digestión con ARNasa A en cada protocolo, las cantidades finales de ARN copurificadas con el ADNg son del 0 al 1 %, cantidades que no son detectables por la mayoría de los métodos. P: ¿Cómo debo almacenar las muestras de ADNg purificadas? R: Las muestras de ADNg purificadas se pueden almacenar a 4 °C. Sin embargo, para un almacenamiento prolongado, recomendamos almacenarlas a -20 °C. El kit de extracción de ADNg Monarch® Spin (Tris-HCl 10 mM, pH 9,0, EDTA 0,1 mM) que se suministra con el kit de purificación de ADN genómico Monarch proporciona mayor seguridad para el almacenamiento prolongado de muestras de ADNg. P: ¿Es el ADNg purificado con Monarch adecuado para la PCR de largo alcance? R: Sí. El gran tamaño de fragmento del ADNg purificado con Monarch lo convierte en un excelente material de partida para métodos de PCR de largo alcance. Para la PCR de largo alcance, recomendamos LongAmp TaqADN Polimerasa (NEB #M0323), LongAmp Taq 2x Master Mix (NEB #M0287) o LongAmp Hot Start Taq Polimerasa (NEB #M0534). El ADN genómico purificado con el kit de extracción de ADN genómico Monarch Spin es de alta calidad y apto para aplicaciones sensibles como PCR de largo alcance y qPCR A. Las reacciones de amplificación se configuraron con pares de cebadores específicos para amplicones de 6, 8, 10, 12, 16 y 20 kb de ADN humano. Se utilizó LongAmp® Hot Start Taq 2x Master Mix (NEB #M0533) y se añadieron 25 ng de ADN molde a cada muestra. Las reacciones de PCR se realizaron en un termociclador Applied Biosystems 2720. El ADN genómico purificado con Monarch, aislado de células HeLa y sangre humana, se comparó con el ADN de referencia comercial de la línea celular humana NA19240 F11. 10 de 20 Se cargó μl en un gel de agarosa al 1,5 %, utilizando la escalera de ADN de 1 kb (NEB n.° N3232) como marcador. Los resultados indicaron que el ADN era de alta integridad y adecuado para PCR de largo alcance. B. El ADN genómico purificado con Monarch de sangre completa humana, células HeLa y cola de ratón se diluyó para producir un rango de cinco logaritmos de concentraciones de plantilla de entrada. Los resultados se generaron utilizando cebadores dirigidos a gHEME (sangre completa humana) y gREL (HeLa, cola de ratón) para ensayos de qPCR con la mezcla maestra Luna Universal qPCR (NEB n.° M3003) y se ciclaron en un termociclador de qPCR Bio-Rad® CFX Touch. Los resultados indicaron que el ADN es altamente puro y libre de inhibidores, óptimo para qPCR. P: ¿Puedo comprar los tampones y columnas Monarch® por separado? R: Las columnas de centrifugación Monarch y varios tampones y reactivos Monarch también se ofrecen por separado. P: Al trabajar con otros kits comerciales basados ​​en columnas de sílice, ocasionalmente veo un precipitado blanco en el Eluido. ¿Qué es esto? R: Algunas matrices de sílice liberan fibras de sílice durante la elución. Aunque las fibras de sílice generalmente no afectan la mayoría de las aplicaciones posteriores, influyen en las mediciones de DO y deben eliminarse mediante centrifugación si se necesitan valores espectrofotométricos fiables. Las columnas de purificación de ADN genómico Monarch contienen una membrana de retención que impide el paso de las fibras de sílice, eliminando así la necesidad de realizar una centrifugación adicional antes de un análisis espectrofotométrico preciso. P: ¿Puedo usar Monarch® RNasa A para otras aplicaciones/flujos de trabajo que no sean la purificación de ADN genómico? R: Aunque NEB no ha validado específicamente el uso de Monarch RNasa A en aplicaciones distintas a la purificación de ADN genómico, la enzima debería funcionar bien en otras aplicaciones que utilizan RNasa A. P: ¿El ADN genómico purificado con Monarch es compatible con plataformas de secuenciación de nueva generación (NGS) como PacBio y nanopore? R: Sí. El ADN genómico purificado con este kit puede utilizarse para diversas aplicaciones en estas plataformas de secuenciación. Suponiendo que se haya utilizado material de entrada de alta calidad, las longitudes de lectura... Se pueden lograr rutinariamente hasta 50 kb utilizando ADN genómico purificado por Monarch a partir de diferentes materiales de partida. La calidad del ADN purificado por Monarch es superior a la del ADN purificado con SDS Proteinasa K, comúnmente utilizado para la secuenciación con Nanopore. 2 µg de ADN genómico de E. coli extraídos con Monarch o siguiendo un protocolo tradicional de isopropanol con SDS Proteinasa K se fragmentaron enzimáticamente con tiempos de incubación idénticos y se utilizaron como ADN de entrada para la preparación de la biblioteca MinION. Se siguió el protocolo del kit 1D de Oxford Nanopore Technology para preparar las bibliotecas. Ambas bibliotecas se procesaron en MinION, los datos se recopilaron durante 48 horas y se realizó la llamada de base utilizando Albacore. El ADN purificado por Monarch tuvo un mejor rendimiento en todas las métricas de secuenciación, incluyendo la longitud de lectura, la calidad de lectura y los datos de secuenciación totales recopilados. Los gráficos ilustran que los datos purificados por Monarch proporcionan un mayor porcentaje de datos de secuenciación de alta calidad que el ADN purificado con SDS Proteinasa K. Monarch proporciona material de partida de excelente calidad para la secuenciación de Pacific Biosciences (PacBio). Se aisló ADN genómico bacteriano de 5x10⁻¹ Células de E. coli ER2683 con el plásmido pACYC184 siguiendo el protocolo rápido Monarch para bacterias Gram-. Se cortaron 10 µg de ADNg purificado con Monarch con un tubo Covaris® g-TUBE, buscando fragmentos de 10 kb. Se utilizaron 5 µg de ADN cortado para la preparación de la biblioteca según el protocolo estándar de PacBio (sin selección de tamaño). Las muestras se secuenciaron en un secuenciador Pacific Biosciences RSII, utilizando la química P6/C4, se cargaron como una biblioteca SMRTbell de 10 pM y los datos se recopilaron en una película de 5 horas. Bases totales (rendimiento): 1208 Mb, longitud promedio de lectura de la polimerasa: 16.046, calidad de lectura de la polimerasa: 0,85. Lecturas promedio de longitud del inserto: 6.060, lecturas de calidad del inserto: 0,89, lectura más larga del inserto: 43.680. A. Las longitudes de los insertos indican que la mayoría de las lecturas fueron En el rango de tamaño de inserto deseado. B. Las longitudes de lectura de la polimerasa indican que el ADN purificado era de alta calidad, lo que permitió que la enzima leyera el inserto varias veces dentro del constructo SMRTbell. C. Los datos de evaluación de carga ilustran además que el ADN purificado es de alta calidad. P: ¿Por qué se desprendió la membrana de sílice de mis columnas Monarch Spin Columns S2C (NEB n.° T3017) durante la preparación de mi ADN genómico? R: Las columnas Monarch Spin Columns S2C se diseñaron sin anillo de retención para evitar la contaminación por arrastre de tampón y garantizar la máxima pureza del ADN eluido. Cuando el protocolo se lleva a cabo según lo especificado, las membranas se mantienen en su lugar y no deberían desprendérsele. Sin embargo, la membrana puede expandirse y desprendérsele en condiciones muy específicas: La columna se carga más de una vez. La muestra lisada o el tampón de lavado se deja reposar sobre la membrana durante demasiado tiempo. La columna se agita en vórtex. Las cantidades de entrada se exceden significativamente. La membrana podría ser más propensa a desprendérsele durante centrifugaciones a baja velocidad. Para kits que contienen Monarch Spin Columns de color naranja. Las columnas S2C (NEB n.° T3017) siguen los protocolos actuales, que no utilizan una centrifugación a baja velocidad (1000 xg durante 3 minutos). Por lo tanto, recomendamos seguir el protocolo especificado y no recargar ni agitar la columna nunca. P: ¿Se puede utilizar el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin (NEB n.° T3010) para aislar ADN genómico de drosófila y otros insectos? R: Sí, y recomendamos seguir el protocolo detallado para la purificación de ADN genómico de insectos. Esta es una versión modificada del protocolo para la purificación de ADN genómico de tejidos, optimizada para el procesamiento de muestras de insectos. P: ¿Se puede utilizar el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin (NEB n.° T3010) para aislar ADN genómico de plantas? R: Aunque no está específicamente optimizado para esta aplicación, muchos usuarios han tenido éxito procesando muestras de plantas (cannabis, hojas de trigo, hojas de orquídea) con el kit de extracción de ADN genómico Monarch Spin. Sin embargo, las muestras de plantas contienen polisacáridos complejos y Polifenoles, ninguno de los cuales se ha optimizado para el sistema de tampón Monarch. Recomendamos seguir el protocolo de tejido. Antes de la lisis con el tampón de lisis tisular, las paredes celulares de la planta deben abrirse lo máximo posible utilizando un mortero para microtubos, moliendo con nitrógeno líquido o utilizando un molino de bolas. Después de la lisis y la incubación con ARNasa A, centrifugar durante 3 minutos a velocidad máxima (≥12 000 xg) para eliminar el material sólido y transferir el sobrenadante a un tubo limpio. Recomendamos usar <25 mg de material de partida y también se recomienda el uso de tejido joven para obtener mejores resultados. Los rendimientos varían significativamente entre las diferentes especies de plantas, tanto en función del tamaño de su genoma como de la accesibilidad del ADN. P: ¿Se puede utilizar el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin (NEB n.° T3010) para aislar ADN genómico de plasma, suero y orina? R: No recomendamos este kit para el aislamiento de ADN genómico de plasma, suero u orina. Este kit no ha sido validado con estos tipos de muestras y no está optimizado para procesar grandes volúmenes de Material de partida. P: ¿Se puede usar el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin (NEB n.° T3010) para aislar ADN genómico (cfDNA)? R: No recomendamos este kit para el aislamiento de ADN genómico (cfDNA). El ADN genómico contiene pequeños fragmentos de ADN, y la química de unión de este kit no está optimizada para fragmentos pequeños. Además, el flujo de trabajo no está optimizado para procesar grandes volúmenes de material de partida, lo cual suele ser necesario al aislar ADN genómico (cfDNA). P: ¿Se puede usar el kit de extracción de ADN genómico Monarch® Spin (NEB n.° T3010) con un colector de vacío? R: Sí, el kit se puede usar con un colector de vacío para la unión y el primer paso de lavado de la Parte 2: Unión y elución del ADN genómico. El segundo paso de lavado y la elución deben realizarse en una centrífuga. La pureza de las muestras purificadas al vacío puede verse reducida, ya que las proteínas y otros componentes celulares pueden permanecer en la membrana; se recomienda la centrifugación a alta velocidad para obtener la máxima pureza y reproducibilidad. P: Las enzimas del kit no se almacenaron a -20 °C inmediatamente. ¿Seguirán funcionando? R: Sí, las enzimas Proteinasa K y ARNasa A Monarch sin abrir son estables a temperatura ambiente a corto plazo. Después de abrirlas, la Proteinasa K y la ARNasa A Monarch deben almacenarse a -20 °C. P: ¿Importa qué anticoagulante se utiliza en las muestras de sangre? R: No. El aislamiento de ADNg de la sangre con el kit de extracción de ADNg Monarch® Spin funciona bien para la sangre tratada con EDTA, citrato o heparina. P: Hay un precipitado en el tubo de la enzima Proteinasa K, ¿es esto normal? R: No es raro ver un precipitado blanco y amorfo en el tubo de Proteinasa K. No hay impacto en la actividad de la Proteinasa K ni en el funcionamiento del kit, por lo que puede continuar con su flujo de trabajo de forma normal. P: Noto que estoy aplicando fuerza para encajar la columna en un tubo de recolección. ¿Debería estar haciendo esto? ¿Qué tubos de recolección son compatibles con las columnas? R: Todos los kits Monarch® incluyen tubos de recolección compatibles con las columnas de centrifugación. Si utiliza tubos de recolección fuera de un kit específico, utilice los tubos de recolección Monarch® Spin (NEB n.° T2118). No fuerce ninguna columna en tubos de recolección no recomendados que tengan un ajuste muy ajustado para evitar dañar la columna. P: He observado que en el kit de extracción de gDNA Monarch® Spin (NEB n.° T3010), las columnas Monarch Spin S2C (NEB n.° T3017) para la purificación de gDNA ahora tienen un color naranja. ¿Afecta esto al rendimiento? R: El color naranja no afecta al rendimiento. Siga las instrucciones de uso recomendadas, incluidas las directrices sobre la cantidad máxima de entrada que se indican en el manual. Guarde las columnas tintadas protegidas de la luz para evitar que el color se desvanezca con el tiempo. Puede haber variaciones naturales en el color de las columnas. P: ¿Por qué se eliminó el centrifugado a baja velocidad (1000 xg durante 3 minutos) de los protocolos del kit de extracción de ADNg Monarch Spin (NEB n.° T3010)? ¿Puedo seguir realizando este centrifugado a baja velocidad? R: El cambio de protocolo para eliminar el paso de centrifugado a baja velocidad (1000 xg durante 3 minutos) en el paso de unión tiene como objetivo agilizar el flujo de trabajo y ahorrar tiempo. Nuestras pruebas no han demostrado ningún impacto en el rendimiento ni en la producción. Se recomienda que los kits que utilizan columnas Monarch Spin S2C de color naranja (NEB n.° T3017) sigan los protocolos actualizados para una mayor eficiencia. P: He utilizado toda la proteinasa K (NEB n.° P8200) incluida en el kit Monarch. ¿Puedo comprar más? R: Sí, la proteinasa K de grado de biología molecular (NEB n.° P8107) está disponible para su compra independiente y puede utilizarse como sustituto directo de la (NEB n.° P8200) en todos los protocolos Monarch sin ninguna modificación. P: Veo residuos de sílice en mi columna Monarch. ¿Es un problema? R: No, no es un problema. La presencia de residuos o partículas de sílice en la columna de purificación de ácidos nucleicos no afecta la unión ni la pureza de los ácidos nucleicos. Nuestras columnas están diseñadas para retener las fibras de sílice, lo que ayuda a garantizar que no se depositen en el eluido final.